黄海疆++++++贺兰云
[摘要] 意图 研讨人工模仿干旱钳制条件下金银花麦苗的生理习惯性反响，为提醒金银花植株的抗旱机制以及抗旱种类的选育供给理论根据。 办法 选用聚乙二醇（PEG-6000）模仿干旱钳制处理金银花麦苗，检测麦苗体内的丙二醛（MDA）含量；超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）等维护酶活性，浸透调理物质脯氨酸（Pro）和可溶性糖含量。 成果 10%、20%和30%PEG处理麦苗后120 h MDA含量别离高出对照组20.31%、28.12%和36.72%，跟着PEG浓度升高，MDA含量逐步添加。SOD、POD、CAT和APX活性整体呈现先升高后下降的趋势，各种酶对干旱钳制的呼应速率不同，CAT于干旱钳制后当即开端发动，SOD、POD于干旱钳制后24 h发动，而APX于干旱钳制后48 h开端发动。Pro和可溶性糖含量均于处理后24 h开端增高，于处理后72 h到达峰值。 定论 跟着干旱程度的添加和钳制的延伸，金银花体内膜质过氧化严峻，经过添加Pro、可溶性糖的含量以及维护酶体系来抵挡干旱钳制，维护酶发动次序为CAT、SOD、POD、APX。
[关键词] 金银花；聚乙二醇（PEG-6000）；丙二醛；脯氨酸；可溶性糖；维护酶
[中图分类号] Q786 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）07（a）-0012-04
金银花（Lonicera japonica Thunb）源于忍冬科植物忍冬的枯燥花蕾或带初开的花，性寒，味甘，具有清热解毒、凉散风热之成效[1]，是中医临床常用药材，也是重要的出口种类。现在金银花年需求量超越2000万公斤，栽培面积不断扩大。河南是金银花主产区，春季干旱是金银花最易遭受的钳制之一，进步金银花植株的抗旱性及抗旱种类选育是现在金银花出产面对的重要问题，现在关于金银花抗旱机制的研讨尚不深化。
聚乙二醇（PEG）是一种高分子浸透剂，可限制水分被植物吸收的速率[2]，是现在模仿干旱钳制常用的材料之一[3]。本试验选用PEG人工模仿水分钳制，测定不同浓度干旱钳制下金银花麦苗体内的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）等维护酶活性；脯氨酸和可溶性糖含量的动态改变，提醒金银花麦苗应对干旱钳制窘境时的生理习惯性反响，为金银花植株耐旱机制研讨以及抗旱种类选育供给根据。
1 材料与办法
1.1 试验材料前期预备
金银花种子采自河北金银花基地，选取颗粒丰满、巨细共同的金银花种子，用10%的H2O2消毒10 min，然后用去离子水清洗3～4次，耕种后置于（25±1）℃的气候箱（硕联SRG-260A）内避光进行金银花种子的萌生，待出苗后，运用1/2 Hoagland营养液进行灌溉培育。培育条件：25℃昼/20℃夜，每日光照时长14 h，光强280～350 μm·m-2s-1，气候箱内相对湿度设置为65%～70%。
1.2 PEG钳制处理
选取长势杰出巨细共同的金银花麦苗，移栽于水培罐中，用Hoagland彻底营养液培育，每3天替换1次营养液，预培2周后进行干旱处理。将PEG-6000（科密欧试剂，剖析纯）用Hoagland营养液别离配制成10%、20%和30%的溶液，对照组（CK）用不含PEG-6000的Hoagland营养液培育。钳制后0 d， 24、48、72、96、120 h后别离取样检测麦苗体内的MDA含量、浸透调理物质（脯氨酸、可溶性糖）的含量、维护酶（SOD、POD、CAT、APX）活性，因为酶有不稳定性，每次试验设6个独立重复。
1.3 测定与办法
1.3.1 MDA含量的测定办法 硫代巴比妥酸（TBA）法[4]。
1.3.2 脯氨酸含量的测定办法 茚三酮比色法[5]。
1.3.3 可溶性糖含量的测定办法 蒽酮法[6]。
1.3.4 维护酶活性的测定办法 联苯三酚自氧化法[7]测定SOD活性，以1 ml反响液中，每分钟按捺联苯三酚自氧化达50%的酶量界说为1个酶单位，酶的活性用U/mg蛋白标明；愈创木酚比色法[8]测定POD活性，1个POD活性单位（U）为每分钟内使A470改变0.01的酶量，酶活性以U/mg蛋白标明；紫外吸收法[9]测定CAT活性，以1 min内A240下降0.1的酶量为1个酶活性单位（U），酶活性以U/mg蛋白标明；APX活性的测定选用紫外分光光度法[10]，1个APX酶活性单位（U）为每分钟使A290改变0.01的酶量，酶活性以U/mg蛋白标明。
1.4 统计学办法
数据选用SPSS 19.0软件进行统计剖析，计量材料选用方差剖析，以P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 人工模仿干旱钳制条件下金银花麦苗体内MDA含量的动态改变
跟着干旱钳制时刻的添加，金银花麦苗体内的MDA含量逐步上升。10%、20%和30%PEG处理后MDA含量改变趋势类似。不同浓度的PEG处理后24 h MDA含量较对照组稍微下降，值别离为3.12%（10%PEG）、1.56%（20%PEG）、1.56%（30%PEG）。PEG处理后72 h 金银花麦苗体内的MDA含量均持续上升，10%PEG处理后72、96、120 h MDA含量与对照组比较别离高出6.25%、15.75%和20.31%；20%PEG处理后别离高出对照组6.25%（10%PEG）、17.32%（20%PEG）和28.12%（30%PEG）；30%PEG处理后别离高出对照20.31%（10%PEG）、18.89%（20%PEG）和36.72%（30%PEG）（图1）。
图1 PEG模仿干旱钳制对金银花麦苗体内MDA含量的影响
2.2人工模仿干旱钳制下金银花麦苗体内浸透调理物质的含量改变
不同程度干旱钳制后24 h植物体内的可溶性糖含量明显进步，钳制后含量72 h到达峰值，然后缓慢下降，标明金银花麦苗体内的可溶性糖调理机制于干旱钳制后24 h发动，跟着钳制程度超出机体耐受程度，体内组成可溶性糖的体系遭到损坏，麦苗体内可溶性糖的含量开端缓慢下降（图2A）。不同程度PEG处理后金银花麦苗体内的脯氨酸含量改变趋势类似，均于钳制后24 h开端升高，于72 h到达高峰然后下降（图2B）。
图2 PEG模仿干旱钳制对金银花麦苗体内浸透调理物质含量的影响
2.3 人工模仿干旱钳制下金银花麦苗体内维护酶活性的改变
不同程度的干旱钳制条件下，植物体内SOD 活性整体呈现出先增高后下降的趋势。10%PEG和20%PEG干旱钳制后24 h SOD活性逐步升高，于处理后72 h到达最大值，别离较对照组进步33.7%和41.2%。30%PEG干旱钳制后24 h SOD活性上升，钳制后24～96 h活性比较稳定，96 h后明显下降（图3A）。
10%PEG和30%PEG处理后金银花体内的POD 活性均呈现先升高后下降的进程，其活性最大值别离呈现在钳制后48、72 h。20%PEG处理后POD活性处于相对陡峭的状况（图3B）。
不同程度干旱钳制后金银花麦苗体内的CAT活性改变趋势类似，即于干旱钳制初期明显升高，均在处理后48 h到达峰值，别离高于对照组23.98%（10%PEG）、25.54%（20%PEG）和21.18%（30%PEG），处理后120 h到达最低值（图3C）。
APX活性于干旱钳制初期无明显改变，干旱钳制后48h APX活性呈现升高趋势，别离写钳制后96h（10%PEG）、96h（20%PEG）和72h（30%PEG）到达峰值（图3D）。
3 评论
通常状况下植物细胞内自由基含量处于动态平衡中，当有窘境呈现时过剩的自由基会导致膜内脂双分子层中所含的不饱和脂肪酸发作氧化分化，形成细胞膜损坏，添加细胞膜的透性。MDA为脂质过氧化产品，其含量凹凸可反映膜损害程度[11]。从金银花麦苗体内的MDA改变状况来看，干旱钳制初期金银花体内的MDA含量下降，暗示金银花在应对干旱钳制时的避旱反响，而钳制后72 h MDA含量逐步添加，标明跟着干旱程度的添加和钳制的延伸，细胞内发作了膜脂的过氧化反响，并且干旱程度越高，细胞膜体系的损害程度越高。
脯氨酸是植物体内一种重要的小分子浸透物质，脯氨酸含量的多少直接关系到植物抗逆性的强弱[12]。可溶性糖也是植物体内的一种重要的浸透调理剂，水分浸透钳制下植物体可经过进步可溶性糖的含量来抵挡干旱钳制[13-14]。调理物质改变状况标明金银花麦苗在遭到干旱钳制24 h后，可溶性糖的组成机制开端发动，于钳制后72 h组成量到达高峰。上述成果标明金银花麦苗于钳制后24 h发动体内脯氨酸和可溶性糖的代谢机制来抵挡外界干旱钳制。
SOD对保持·O2-的平衡起重要的效果，是生物维护酶体系的重要成员[15]。从干旱钳制下活性酶变的化状况来看，低度干旱钳制和中度干旱钳制下SOD活性不断升高，消除体内过剩的自由基，保持机体环境的平衡，而在重度干旱钳制下SOD也于24 h发动，当干旱程度超越机体耐受极限时SOD活性急剧下降。
POD是植物体内防护活性氧损害的首要酶类之一[16]。CAT能分化细胞代谢进程中发作的过氧化氢，以防止过氧化氢在生物体内发作毒性效果[17]。APX能够经过铲除活性氧而维护细胞免于损害[18]。试验成果标明，干旱钳制下金银花体内的CAT活性升高的开端时刻较SOD和POD要早，也就是说干旱钳制下金银花先发动CAT酶来抵挡干旱钳制，当干旱程度超出机体的耐受才能时，CAT活性逐步下降。
结合各种维护酶的生理生化特性及金银花体内这4种酶活性的动态改变来看，不同程度的干旱钳制这4种维护酶对干旱钳制的呼应速率不同，金银花首要发动CAT活性，分化植物体内代谢发作的H2O2，其次发动SOD活性，将·O2-歧化为H2O2。POD与SOD酶一起发动将O2催化还原为·O2-，最终发动APX，它能够辅佐铲除H2O2等活性氧。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典·一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：205-206.
[2] 李季平，古红梅，吴诗光，等.聚乙二醇（PEG）处理对小麦萌生种子生理生化特性的影响[J].河南农业科学，2002， 31（6）：4-6.
[3] 龚子端，李高阳.PEG干旱钳制对植物的影响[J].河南林业科技，2006，26（3）：21.
[4] 李合生.植物生理生化试验原理和技能[M].北京：高等教育出版社，2000：261-263.
[5] 上海植物生理学会.植物生理学试验手册[M].上海：上海科技出版社，1985：303，305，314.
[6] 刘海英，王华华，崔长海，等.可溶性糖含量测定（蒽酮法）试验的改善[J].试验室科学，2013，16（2）：19，20.
[7] 柳林，王艳.常绿植物SOD活性与植物耐寒力相关性的研讨[J].健康师专学报，2001，13（2）：47-49.
[8] Bai BZ，Sun CH，Tian WX.Experimental Mannual of Plant Physiology[M].2nd.Beijing：Chinese Agricultural Press，1998：79-81，107-108.
[9] 高俊凤.植物生理学试验技能[M].西安：国际图书出版公司，2000：194.
[10] 曹慧，王孝威，曹琴，等.水分钳制下新红星苹果超氧物自由基累积和膜脂过氧化效果[J].果树学报，2001，18（4）：196-199.
[11] 孙伟泽，韩博，胡晓宁，等.不同浓度盐钳制下苜蓿丙二醛含量改变[J].安徽农业科学，2009，37（5）：1905-1906.
[12] 赵瑞雪，朱慧森，程钰宏，等.植物脯氨酸及其组成酶系研讨进展[J].草业科学，2008，25（2）：90-96.
[13] Bell JE，Bell ET.Proteins and enzyme[Z].Prentice-Hall，Inc，1988.
[14] 诺顿.植物蛋白[M].北京：科学出版社，1983.
[15] 孙黎，肖璐，阎平，等.藜科12种盐生植物SOD活性及其同工酶的开端研讨[J].石河子大学学报，2004，22（6）：500-503.
[16] 孙存华，李扬，贺鸿雁，等.藜对干旱钳制的生理生化反响[J].生态学报，2005，25（10）：2556-2560.
[17] 李宏文，史绮，曹阳，等.紫外光对几种水生植物过氧化氢酶（CAT）活性的影响[J].环境科学，1993，4（14）：74-77.
[18] 王超，杨传平，王玉成.白桦抗坏血酸过氧化物酶（APX）基因克隆及表达剖析[J].东北林业大学学报，2009，37（3）：79-81.
（收稿日期：2014-05-21 本文修改：许俊琴）
图1 PEG模仿干旱钳制对金银花麦苗体内MDA含量的影响
2.2人工模仿干旱钳制下金银花麦苗体内浸透调理物质的含量改变
不同程度干旱钳制后24 h植物体内的可溶性糖含量明显进步，钳制后含量72 h到达峰值，然后缓慢下降，标明金银花麦苗体内的可溶性糖调理机制于干旱钳制后24 h发动，跟着钳制程度超出机体耐受程度，体内组成可溶性糖的体系遭到损坏，麦苗体内可溶性糖的含量开端缓慢下降（图2A）。不同程度PEG处理后金银花麦苗体内的脯氨酸含量改变趋势类似，均于钳制后24 h开端升高，于72 h到达高峰然后下降（图2B）。
图2 PEG模仿干旱钳制对金银花麦苗体内浸透调理物质含量的影响
2.3 人工模仿干旱钳制下金银花麦苗体内维护酶活性的改变
不同程度的干旱钳制条件下，植物体内SOD 活性整体呈现出先增高后下降的趋势。10%PEG和20%PEG干旱钳制后24 h SOD活性逐步升高，于处理后72 h到达最大值，别离较对照组进步33.7%和41.2%。30%PEG干旱钳制后24 h SOD活性上升，钳制后24～96 h活性比较稳定，96 h后明显下降（图3A）。
10%PEG和30%PEG处理后金银花体内的POD 活性均呈现先升高后下降的进程，其活性最大值别离呈现在钳制后48、72 h。20%PEG处理后POD活性处于相对陡峭的状况（图3B）。
不同程度干旱钳制后金银花麦苗体内的CAT活性改变趋势类似，即于干旱钳制初期明显升高，均在处理后48 h到达峰值，别离高于对照组23.98%（10%PEG）、25.54%（20%PEG）和21.18%（30%PEG），处理后120 h到达最低值（图3C）。
APX活性于干旱钳制初期无明显改变，干旱钳制后48h APX活性呈现升高趋势，别离写钳制后96h（10%PEG）、96h（20%PEG）和72h（30%PEG）到达峰值（图3D）。
3 评论
通常状况下植物细胞内自由基含量处于动态平衡中，当有窘境呈现时过剩的自由基会导致膜内脂双分子层中所含的不饱和脂肪酸发作氧化分化，形成细胞膜损坏，添加细胞膜的透性。MDA为脂质过氧化产品，其含量凹凸可反映膜损害程度[11]。从金银花麦苗体内的MDA改变状况来看，干旱钳制初期金银花体内的MDA含量下降，暗示金银花在应对干旱钳制时的避旱反响，而钳制后72 h MDA含量逐步添加，标明跟着干旱程度的添加和钳制的延伸，细胞内发作了膜脂的过氧化反响，并且干旱程度越高，细胞膜体系的损害程度越高。
脯氨酸是植物体内一种重要的小分子浸透物质，脯氨酸含量的多少直接关系到植物抗逆性的强弱[12]。可溶性糖也是植物体内的一种重要的浸透调理剂，水分浸透钳制下植物体可经过进步可溶性糖的含量来抵挡干旱钳制[13-14]。调理物质改变状况标明金银花麦苗在遭到干旱钳制24 h后，可溶性糖的组成机制开端发动，于钳制后72 h组成量到达高峰。上述成果标明金银花麦苗于钳制后24 h发动体内脯氨酸和可溶性糖的代谢机制来抵挡外界干旱钳制。
SOD对保持·O2-的平衡起重要的效果，是生物维护酶体系的重要成员[15]。从干旱钳制下活性酶变的化状况来看，低度干旱钳制和中度干旱钳制下SOD活性不断升高，消除体内过剩的自由基，保持机体环境的平衡，而在重度干旱钳制下SOD也于24 h发动，当干旱程度超越机体耐受极限时SOD活性急剧下降。
POD是植物体内防护活性氧损害的首要酶类之一[16]。CAT能分化细胞代谢进程中发作的过氧化氢，以防止过氧化氢在生物体内发作毒性效果[17]。APX能够经过铲除活性氧而维护细胞免于损害[18]。试验成果标明，干旱钳制下金银花体内的CAT活性升高的开端时刻较SOD和POD要早，也就是说干旱钳制下金银花先发动CAT酶来抵挡干旱钳制，当干旱程度超出机体的耐受才能时，CAT活性逐步下降。
结合各种维护酶的生理生化特性及金银花体内这4种酶活性的动态改变来看，不同程度的干旱钳制这4种维护酶对干旱钳制的呼应速率不同，金银花首要发动CAT活性，分化植物体内代谢发作的H2O2，其次发动SOD活性，将·O2-歧化为H2O2。POD与SOD酶一起发动将O2催化还原为·O2-，最终发动APX，它能够辅佐铲除H2O2等活性氧。
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[9] 高俊凤.植物生理学试验技能[M].西安：国际图书出版公司，2000：194.
[10] 曹慧，王孝威，曹琴，等.水分钳制下新红星苹果超氧物自由基累积和膜脂过氧化效果[J].果树学报，2001，18（4）：196-199.
[11] 孙伟泽，韩博，胡晓宁，等.不同浓度盐钳制下苜蓿丙二醛含量改变[J].安徽农业科学，2009，37（5）：1905-1906.
[12] 赵瑞雪，朱慧森，程钰宏，等.植物脯氨酸及其组成酶系研讨进展[J].草业科学，2008，25（2）：90-96.
[13] Bell JE，Bell ET.Proteins and enzyme[Z].Prentice-Hall，Inc，1988.
[14] 诺顿.植物蛋白[M].北京：科学出版社，1983.
[15] 孙黎，肖璐，阎平，等.藜科12种盐生植物SOD活性及其同工酶的开端研讨[J].石河子大学学报，2004，22（6）：500-503.
[16] 孙存华，李扬，贺鸿雁，等.藜对干旱钳制的生理生化反响[J].生态学报，2005，25（10）：2556-2560.
[17] 李宏文，史绮，曹阳，等.紫外光对几种水生植物过氧化氢酶（CAT）活性的影响[J].环境科学，1993，4（14）：74-77.
[18] 王超，杨传平，王玉成.白桦抗坏血酸过氧化物酶（APX）基因克隆及表达剖析[J].东北林业大学学报，2009，37（3）：79-81.
（收稿日期：2014-05-21 本文修改：许俊琴）
图1 PEG模仿干旱钳制对金银花麦苗体内MDA含量的影响
2.2人工模仿干旱钳制下金银花麦苗体内浸透调理物质的含量改变
不同程度干旱钳制后24 h植物体内的可溶性糖含量明显进步，钳制后含量72 h到达峰值，然后缓慢下降，标明金银花麦苗体内的可溶性糖调理机制于干旱钳制后24 h发动，跟着钳制程度超出机体耐受程度，体内组成可溶性糖的体系遭到损坏，麦苗体内可溶性糖的含量开端缓慢下降（图2A）。不同程度PEG处理后金银花麦苗体内的脯氨酸含量改变趋势类似，均于钳制后24 h开端升高，于72 h到达高峰然后下降（图2B）。
图2 PEG模仿干旱钳制对金银花麦苗体内浸透调理物质含量的影响
2.3 人工模仿干旱钳制下金银花麦苗体内维护酶活性的改变
不同程度的干旱钳制条件下，植物体内SOD 活性整体呈现出先增高后下降的趋势。10%PEG和20%PEG干旱钳制后24 h SOD活性逐步升高，于处理后72 h到达最大值，别离较对照组进步33.7%和41.2%。30%PEG干旱钳制后24 h SOD活性上升，钳制后24～96 h活性比较稳定，96 h后明显下降（图3A）。
10%PEG和30%PEG处理后金银花体内的POD 活性均呈现先升高后下降的进程，其活性最大值别离呈现在钳制后48、72 h。20%PEG处理后POD活性处于相对陡峭的状况（图3B）。
不同程度干旱钳制后金银花麦苗体内的CAT活性改变趋势类似，即于干旱钳制初期明显升高，均在处理后48 h到达峰值，别离高于对照组23.98%（10%PEG）、25.54%（20%PEG）和21.18%（30%PEG），处理后120 h到达最低值（图3C）。
APX活性于干旱钳制初期无明显改变，干旱钳制后48h APX活性呈现升高趋势，别离写钳制后96h（10%PEG）、96h（20%PEG）和72h（30%PEG）到达峰值（图3D）。
3 评论
通常状况下植物细胞内自由基含量处于动态平衡中，当有窘境呈现时过剩的自由基会导致膜内脂双分子层中所含的不饱和脂肪酸发作氧化分化，形成细胞膜损坏，添加细胞膜的透性。MDA为脂质过氧化产品，其含量凹凸可反映膜损害程度[11]。从金银花麦苗体内的MDA改变状况来看，干旱钳制初期金银花体内的MDA含量下降，暗示金银花在应对干旱钳制时的避旱反响，而钳制后72 h MDA含量逐步添加，标明跟着干旱程度的添加和钳制的延伸，细胞内发作了膜脂的过氧化反响，并且干旱程度越高，细胞膜体系的损害程度越高。
脯氨酸是植物体内一种重要的小分子浸透物质，脯氨酸含量的多少直接关系到植物抗逆性的强弱[12]。可溶性糖也是植物体内的一种重要的浸透调理剂，水分浸透钳制下植物体可经过进步可溶性糖的含量来抵挡干旱钳制[13-14]。调理物质改变状况标明金银花麦苗在遭到干旱钳制24 h后，可溶性糖的组成机制开端发动，于钳制后72 h组成量到达高峰。上述成果标明金银花麦苗于钳制后24 h发动体内脯氨酸和可溶性糖的代谢机制来抵挡外界干旱钳制。
SOD对保持·O2-的平衡起重要的效果，是生物维护酶体系的重要成员[15]。从干旱钳制下活性酶变的化状况来看，低度干旱钳制和中度干旱钳制下SOD活性不断升高，消除体内过剩的自由基，保持机体环境的平衡，而在重度干旱钳制下SOD也于24 h发动，当干旱程度超越机体耐受极限时SOD活性急剧下降。
POD是植物体内防护活性氧损害的首要酶类之一[16]。CAT能分化细胞代谢进程中发作的过氧化氢，以防止过氧化氢在生物体内发作毒性效果[17]。APX能够经过铲除活性氧而维护细胞免于损害[18]。试验成果标明，干旱钳制下金银花体内的CAT活性升高的开端时刻较SOD和POD要早，也就是说干旱钳制下金银花先发动CAT酶来抵挡干旱钳制，当干旱程度超出机体的耐受才能时，CAT活性逐步下降。
结合各种维护酶的生理生化特性及金银花体内这4种酶活性的动态改变来看，不同程度的干旱钳制这4种维护酶对干旱钳制的呼应速率不同，金银花首要发动CAT活性，分化植物体内代谢发作的H2O2，其次发动SOD活性，将·O2-歧化为H2O2。POD与SOD酶一起发动将O2催化还原为·O2-，最终发动APX，它能够辅佐铲除H2O2等活性氧。
[参考文献]
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（收稿日期：2014-05-21 本文修改：许俊琴）
