彭丽英+彭攸灵+杨先国
[摘要] 意图 树立不同产地桑叶UPLC指纹图谱。 办法 选用ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50.0 mm，1.7 μm）色谱柱，活动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脱，检测波长为358 nm，流速为0.6 ml/min，柱温40℃，进样体积1 μl。 成果 树立了桑叶专特色的UPLC指纹图谱，断定了15个共有峰，不同产地桑叶样品具有较好的类似度。定论 UPLC指纹图谱办法重复性好，简洁牢靠，可用于桑叶的快速辨别，可以为桑叶的质量操控和商场使用供给依据。
[关键词] 桑叶；指纹图谱；超高效液相色谱法
[中图分类号] R286[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）05（b）-0008-04
Study on UPLC fingerprint of Morus alba L. from different regions
PENG Li-ying PENG You-ling YANG Xian-guo▲
Hunan Traditional Chinese Medical College,Zhuzhou412012,China
[Abstract] Objective To establish UPLC fingerprint of Morus alba L. from different regions. Methods Column ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50.0 mm,1.7 μm)was used.The mobile phase was methanol-0.2％ phosphoric acid water with gradient elution.The detection wave-lengths was 358 nm and column temperature was 40℃ with the flow rate of 0.6 ml/min.The sample injection was 1 μl. Results A specificity fingerprint chromatogram was produced and 15 characteristic peaks were designated.The results showed that the collected samples had a good similarity. Conclusion UPLC fingerprint is a reliable,available and quick method of quality control of Morus alba L. and it is necessary for the safe and practicable use of the medicine.
[Key words] Morus alba L.;Fingerprint;UPLC
桑叶为桑科植物桑（Morus alba L.）的叶，初露后采收，除掉杂质，晾干，具有分散风热、清肺润燥、清肝明意图成效，首要用于风热伤风、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花[1]。桑叶药食两用，现代研讨标明桑叶具有降血糖[2-4]、降血压[5]、降血脂、抗炎、抗变老[6]、抗肿瘤[7]等成效，在药用和食物保健方面都发挥了重要效果。现在，桑叶的质量操控首要集中于芦丁和绿原酸含量的测定[8-12]，除芦丁外，其他黄酮类化合物也是桑叶质量操控的热门[13-16]。跟着国内外商场对桑叶的需求愈来愈大，桑叶的质量也良莠不齐。课题组以为中药是多成分、多环节、多靶点的药物，质量操控也需求表现中药特征，仅靠单一或几个目标难以衡量质量的好坏。中药指纹图谱是一种归纳的、可量化的判定手法，是树立在中药化学成分体系研讨的基础上，首要用于点评中药材及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和安稳性，契合中医中药整体性和含糊性的特色[17]。课题组为了进一步操控桑叶质量，选用UPLC办法，对从全国搜集的桑叶药材进行指纹图谱进行研讨。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
KQ-100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；JA51002型电子剖析天平（岛津）；Waters Acquity UPLC H-Class超高效液相色谱体系，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器（Waters公司）。
1.2 试剂
甲醇（色谱纯，TEDIA公司），乙腈（色谱纯，TEDIA公司），水为娃哈哈纯净水，磷酸（色谱纯，北京化工厂）。
1.3 对照品及药材
对照品异槲皮苷和紫云英苷，购于成都植标化纯生物技能有限公司，供含量测定用，批号别离为PCS0371-lot 120510和PCS0468-lot 120328；对照品芦丁购于我国食物药品检定研讨院，批号为0080-9705。不同产地的桑叶药材11批，均由湖南中医药大学生药学教研室潘清平教授判定为桑科植物桑（Morus alba L.）的叶，药材批号及来历见表1。
表1 桑叶药材批号及来历
2 办法与成果
2.1 色谱条件
色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50.0 mm，1.7 μm）；流速：0.6 ml/min；检测波长：358 nm；柱温：40℃；进样体积：1 μl；活动相：甲醇（A）-0.2%磷酸水（B）梯度洗脱，洗脱程序：0→22 min，10%A→32%A。
2.2 供试品溶液的制备
药材破坏，过60目筛，取药粉约0.5 g，精细称定，置于100 ml三角瓶中，参加75%甲醇50 ml，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，用75%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备
精细称取对照品异槲皮苷、芦丁和紫云英苷适量，用75%甲醇溶解，定容，得到其浓度别离为0.092、0.042、0.054 μg/μl。
2.4 办法学调查
2.4.1 精细度试验取同一批桑叶供试品（20080305），依照2.2项的办法制备供试品溶液1份，依照上述色谱条件，接连进样6次，测定指纹图谱。以10号峰（图1）的保存时刻和峰面积为参照，核算样品中所含15个共有峰的相对保存时刻和相对峰面积。各共有峰的相对保存时刻的RSD＜0.5％，相对峰面积的RSD＜1.0％，标明仪器的精细度杰出。
图1 桑叶药材共有形式指纹图谱
2.4.2 重复性试验按上述办法平行制备同一批桑叶供试品（20080305），测定指纹图谱。调查样品中所含有15个共有峰的相对保存时刻和相对峰面积，各色谱峰的相对保存时刻的RSD＜0.5%，相对峰面积的RSD＜1.0％，提示办法的重复性杰出。
2.4.3 安稳性试验同一批桑叶供试品（20080305）溶液，别离于0、2、4、6、8、12、24 h进样测定，以各峰的相对保存时刻和相对峰面积进行调查，桑叶样品24 h各色谱峰的相对保存时刻的RSD＜0.5％，相对峰面积的RSD＜1.0％，标明桑叶样品溶液在24 h内安稳性杰出。
2.5 指纹图谱的树立
2.5.1 指纹图谱共有形式的树立取桑叶药材样品11批，依照2.2下办法制备供试品溶液，别离进样1 μl，记载UPLC色谱图。选用国家药典委员会中药色谱指纹图谱类似度点评体系软件（2.0版）进行剖析，生成共有形式指纹图谱，有15个共有峰（图1），其间以峰10（S峰）为参照物，其他各共有峰与峰10的相对保存时刻与相对保存面积见表2。
2.5.2 共有峰的断定11批桑叶药材样品导入软件，得共有指纹图谱（图2），对照品溶液的色谱图见图3，经与对照品对照，指认10、11、12号峰别离为异槲皮苷、芦丁、紫云英苷。
2.5.3 指纹图谱的类似度点评上述11批桑叶样品类似度核算成果依次为0.970、0.968、0.967、0.896、0.941、0.983、0.983、0.918、0.964、0.994、0.989、0.989，以上数据标明桑叶各批次类似性较好。
3 评论
本次试验选用UPLC展开桑叶指纹图谱研讨，与HPLC比较，UPLC办法快速简洁、安稳牢靠。本次桑叶指纹图谱试验剖析时刻在22 min内，愈加方便和节省溶剂。
本试验依据桑叶中首要成分为黄酮类、酚酸类化合物，在75%甲醇中有相对较好的溶解度，挑选75%甲醇超声，样品前处理简略、可控；样品呈弱酸性，挑选极低浓度的磷酸水溶液作为水相；挑选甲醇作为有机相来剖析中药桑叶，与乙腈比较愈加安全和廉价；波长挑选358 nm也是依据首要化合物在该波利益吸收相对最大，且杂质搅扰较少；梯度挑选均一梯度改变以确保样品具有更好的重复性。
类似度成果标明，不同批次桑叶样品类似度核算成果均＞0.85，标明所搜集的桑叶药材质量相对均一安稳，当然也与药用桑叶样品只要一种来历有关。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京：化学工业出版社，2010：279.
[2]李超，潘建明，罗新根，等.桑叶消渴胶囊对2型糖尿病大鼠的影响[J].海南医学，2012，23（2）：18-20.
[3]陈建国，步文磊.桑叶多糖降糖效果及其机制研讨[J].中草药，2011，42（3）：515-520.
[4]罗存敏.桑叶提取物对小鼠血糖的影响及其有用成份测定[J].蚕业科学，2005，31（4）：418-421.
[5]阎百传.霜桑叶安稳了我的血压[J].长命，2008，（12）：43.
[6]王灿，左艇，王琳琳.桑叶黄酮抗皮肤变老试验研讨[J].我国医药导报，2011，8（3）：30-32.
[7]杨燕，王洪庆，陈若芸.桑叶中的黄酮类化合物[J].药学学报，2010，（1）：77-81.
[8]周美环，赵书楷，陈淼，等.HPLC法测定桑叶中芦丁的含量[J].辽宁中医药大学学报，2010，12（5）：228-229.
[9]雷霖，何健飞.高效液相色谱法测定桑叶中芦丁的含量[J].我国卫生查验杂志，2012，22（3）：468-469.
[10]郭红霞，谢文剑，曹艺，等.RP-HPLC测定桑叶中绿原酸的含量[J].我国当代医药，2014，21（4）：17-19.
[11]徐韧柳，李丽华，康怀萍.RP-HPLC测定桑叶中绿原酸的含量[J].我国中医药信息杂志，2005，12（1）：53-54.
[12]孙莲，张丽静，孟磊，等.RP-HPLC法测定桑叶中绿原酸的含量[J].中草药，2003，34（1）：78-79.
[13]严安靖，袁野，吴亮，等.HPLC法一起测定桑叶中芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的含量[J].安徽医药，2011，15（3）：296-298.
[14]吴羽艳.桑叶中总黄酮的含量测定办法研讨[J].轻工科技，2013，（4）：43-44.
[15]张亮亮，汪咏梅，徐曼，等.不同种类桑叶多酚和黄酮含量改变规则研讨[J].时珍国医国药，2013，24（5）：1064-1066.
[16]张强，孙长波，张晶.桑叶中多糖和总黄酮的含量测定[J].吉林农业·学术版，2011，（3）：73-74.
[17]李强，杜思邈，张忠亮，等.中药指纹图谱技能发展及未来发展方向展望[J].中草药，2013，44（22）：3095-3104.
（收稿日期：2014-04-08本文修改：李亚聪）
[作者简介] 彭丽英（1977-），女，湖南怀化人，本科，主管中药师，首要从事中药判定与中药调剂、中药质量标准的教育与科研工作
▲通讯作者：杨先国（1977-），男，湖南桃源人，讲师，博士，首要研讨方向为中药判定与质量操控研讨
2.5 指纹图谱的树立
2.5.1 指纹图谱共有形式的树立取桑叶药材样品11批，依照2.2下办法制备供试品溶液，别离进样1 μl，记载UPLC色谱图。选用国家药典委员会中药色谱指纹图谱类似度点评体系软件（2.0版）进行剖析，生成共有形式指纹图谱，有15个共有峰（图1），其间以峰10（S峰）为参照物，其他各共有峰与峰10的相对保存时刻与相对保存面积见表2。
2.5.2 共有峰的断定11批桑叶药材样品导入软件，得共有指纹图谱（图2），对照品溶液的色谱图见图3，经与对照品对照，指认10、11、12号峰别离为异槲皮苷、芦丁、紫云英苷。
2.5.3 指纹图谱的类似度点评上述11批桑叶样品类似度核算成果依次为0.970、0.968、0.967、0.896、0.941、0.983、0.983、0.918、0.964、0.994、0.989、0.989，以上数据标明桑叶各批次类似性较好。
3 评论
本次试验选用UPLC展开桑叶指纹图谱研讨，与HPLC比较，UPLC办法快速简洁、安稳牢靠。本次桑叶指纹图谱试验剖析时刻在22 min内，愈加方便和节省溶剂。
本试验依据桑叶中首要成分为黄酮类、酚酸类化合物，在75%甲醇中有相对较好的溶解度，挑选75%甲醇超声，样品前处理简略、可控；样品呈弱酸性，挑选极低浓度的磷酸水溶液作为水相；挑选甲醇作为有机相来剖析中药桑叶，与乙腈比较愈加安全和廉价；波长挑选358 nm也是依据首要化合物在该波利益吸收相对最大，且杂质搅扰较少；梯度挑选均一梯度改变以确保样品具有更好的重复性。
类似度成果标明，不同批次桑叶样品类似度核算成果均＞0.85，标明所搜集的桑叶药材质量相对均一安稳，当然也与药用桑叶样品只要一种来历有关。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京：化学工业出版社，2010：279.
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[5]阎百传.霜桑叶安稳了我的血压[J].长命，2008，（12）：43.
[6]王灿，左艇，王琳琳.桑叶黄酮抗皮肤变老试验研讨[J].我国医药导报，2011，8（3）：30-32.
[7]杨燕，王洪庆，陈若芸.桑叶中的黄酮类化合物[J].药学学报，2010，（1）：77-81.
[8]周美环，赵书楷，陈淼，等.HPLC法测定桑叶中芦丁的含量[J].辽宁中医药大学学报，2010，12（5）：228-229.
[9]雷霖，何健飞.高效液相色谱法测定桑叶中芦丁的含量[J].我国卫生查验杂志，2012，22（3）：468-469.
[10]郭红霞，谢文剑，曹艺，等.RP-HPLC测定桑叶中绿原酸的含量[J].我国当代医药，2014，21（4）：17-19.
[11]徐韧柳，李丽华，康怀萍.RP-HPLC测定桑叶中绿原酸的含量[J].我国中医药信息杂志，2005，12（1）：53-54.
[12]孙莲，张丽静，孟磊，等.RP-HPLC法测定桑叶中绿原酸的含量[J].中草药，2003，34（1）：78-79.
[13]严安靖，袁野，吴亮，等.HPLC法一起测定桑叶中芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的含量[J].安徽医药，2011，15（3）：296-298.
[14]吴羽艳.桑叶中总黄酮的含量测定办法研讨[J].轻工科技，2013，（4）：43-44.
[15]张亮亮，汪咏梅，徐曼，等.不同种类桑叶多酚和黄酮含量改变规则研讨[J].时珍国医国药，2013，24（5）：1064-1066.
[16]张强，孙长波，张晶.桑叶中多糖和总黄酮的含量测定[J].吉林农业·学术版，2011，（3）：73-74.
[17]李强，杜思邈，张忠亮，等.中药指纹图谱技能发展及未来发展方向展望[J].中草药，2013，44（22）：3095-3104.
（收稿日期：2014-04-08本文修改：李亚聪）
[作者简介] 彭丽英（1977-），女，湖南怀化人，本科，主管中药师，首要从事中药判定与中药调剂、中药质量标准的教育与科研工作
▲通讯作者：杨先国（1977-），男，湖南桃源人，讲师，博士，首要研讨方向为中药判定与质量操控研讨
2.5 指纹图谱的树立
2.5.1 指纹图谱共有形式的树立取桑叶药材样品11批，依照2.2下办法制备供试品溶液，别离进样1 μl，记载UPLC色谱图。选用国家药典委员会中药色谱指纹图谱类似度点评体系软件（2.0版）进行剖析，生成共有形式指纹图谱，有15个共有峰（图1），其间以峰10（S峰）为参照物，其他各共有峰与峰10的相对保存时刻与相对保存面积见表2。
2.5.2 共有峰的断定11批桑叶药材样品导入软件，得共有指纹图谱（图2），对照品溶液的色谱图见图3，经与对照品对照，指认10、11、12号峰别离为异槲皮苷、芦丁、紫云英苷。
2.5.3 指纹图谱的类似度点评上述11批桑叶样品类似度核算成果依次为0.970、0.968、0.967、0.896、0.941、0.983、0.983、0.918、0.964、0.994、0.989、0.989，以上数据标明桑叶各批次类似性较好。
3 评论
本次试验选用UPLC展开桑叶指纹图谱研讨，与HPLC比较，UPLC办法快速简洁、安稳牢靠。本次桑叶指纹图谱试验剖析时刻在22 min内，愈加方便和节省溶剂。
本试验依据桑叶中首要成分为黄酮类、酚酸类化合物，在75%甲醇中有相对较好的溶解度，挑选75%甲醇超声，样品前处理简略、可控；样品呈弱酸性，挑选极低浓度的磷酸水溶液作为水相；挑选甲醇作为有机相来剖析中药桑叶，与乙腈比较愈加安全和廉价；波长挑选358 nm也是依据首要化合物在该波利益吸收相对最大，且杂质搅扰较少；梯度挑选均一梯度改变以确保样品具有更好的重复性。
类似度成果标明，不同批次桑叶样品类似度核算成果均＞0.85，标明所搜集的桑叶药材质量相对均一安稳，当然也与药用桑叶样品只要一种来历有关。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京：化学工业出版社，2010：279.
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[3]陈建国，步文磊.桑叶多糖降糖效果及其机制研讨[J].中草药，2011，42（3）：515-520.
[4]罗存敏.桑叶提取物对小鼠血糖的影响及其有用成份测定[J].蚕业科学，2005，31（4）：418-421.
[5]阎百传.霜桑叶安稳了我的血压[J].长命，2008，（12）：43.
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[12]孙莲，张丽静，孟磊，等.RP-HPLC法测定桑叶中绿原酸的含量[J].中草药，2003，34（1）：78-79.
[13]严安靖，袁野，吴亮，等.HPLC法一起测定桑叶中芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的含量[J].安徽医药，2011，15（3）：296-298.
[14]吴羽艳.桑叶中总黄酮的含量测定办法研讨[J].轻工科技，2013，（4）：43-44.
[15]张亮亮，汪咏梅，徐曼，等.不同种类桑叶多酚和黄酮含量改变规则研讨[J].时珍国医国药，2013，24（5）：1064-1066.
[16]张强，孙长波，张晶.桑叶中多糖和总黄酮的含量测定[J].吉林农业·学术版，2011，（3）：73-74.
[17]李强，杜思邈，张忠亮，等.中药指纹图谱技能发展及未来发展方向展望[J].中草药，2013，44（22）：3095-3104.
（收稿日期：2014-04-08本文修改：李亚聪）
[作者简介] 彭丽英（1977-），女，湖南怀化人，本科，主管中药师，首要从事中药判定与中药调剂、中药质量标准的教育与科研工作
▲通讯作者：杨先国（1977-），男，湖南桃源人，讲师，博士，首要研讨方向为中药判定与质量操控研讨
