邵发保+++徐祝丽+++黄勤兰
[摘要] 意图 检测miR-26a在胃癌安排的表达改动，清晰miR-26a调控胃癌细胞成长的分子机制。办法 运用qRT-PCR检测71例胃癌及相应癌旁正常安排中miR-26a的表达改动；将miR-26a 模仿物转染胃癌细胞AGS，选用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响；然后选用MTT法检测高表达miR-26a对AGS细胞成长增殖的影响。成果 qRT-PCR检测成果显现，miR-26a在71例胃癌安排中表达下调0.44倍；Western blot成果显现，过表达miR-26a或搅扰MTDH可按捺MTDH蛋白的表达。MTT检测发现，转染MTDH siRNA和miR-26a 模仿物组AGS细胞从48 h起OD值分别为（0.158±0.006）、（0.201±0.006），与对照组细胞比较（0.515±0.032）、（0.479±0.028），差异均有统计学含义（P<0.05）。 定论 miR-26a经过靶向调控MTDH的表达而按捺胃癌细胞的成长。
[关键词] miR-26a；胃癌；成长增殖
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）26-0011-03
miRNAs 调控重要的生物学进程，包含发育、细胞增殖和凋亡、细胞分解、代谢等，而且在许多疾病中表达失调，包含肿瘤[1，2]。依据生物软件的猜测，每个miRNA可能调控上百个靶基因，大约调控人类1/3蛋白编码基因的表达。现在，对miRNA的研讨正逐渐从根本的肿瘤分子研讨走向临床使用领域。miRNAs可作为一个潜在的生物标志物用于胃癌的确诊、预后、药物反响以及易理性的猜测等方面的潜能。研讨标明，miR-26a在肝癌、鼻咽癌、胃癌以及乳腺癌安排和细胞中表达下调，且按捺肿瘤细胞的成长增殖[3-5]。但miR-26a在胃癌中的详细生物学功用并不清楚。本研讨拟经过选用qRT-PCR、Western blot以及MTT法检测miR-26a在胃癌中的生物学效果及效果机制。
1 资料与办法
1.1临床资料
搜集2008年1月～2013年7月间我院收治且确诊为胃癌的患者71例。中位年纪53（39～70）岁。病理确诊成果均经两名以上病理科医师承认。
1.2首要资料
miR-26a 模仿物及对照模仿物从Ambion公司购买。MTDH siRNA质粒从santa cruz公司购买。MTDH抗体和β-actin抗体购自santa cruz公司。Trizol和Lipofectamine 2000转染试剂购自美国Invitrogen公司。PRIM1640培育基和胎牛血清为Gibco公司产品。MTS细胞成长增殖/毒性检测试剂盒购自美国Sigma公司。
1.3 Western blot
将miR-26a模仿物或MTDH siRNA质粒转染AGS细胞，48 h后提取细胞总蛋白，BCA法测定蛋白浓度。各组取等量样本，进行SDS-PAGE凝胶电泳，然后将蛋白转移至PVDF膜上，5%BSA关闭，参加MTDH或GAPDH抗体，4℃过夜。TBST洗膜30 min，参加二抗室温孵育1 h，TBST洗膜30 min，参加ECL发光剂，X片曝光、显影、定影。
1.4 MTT法检测细胞增殖活性
取转染后的AGS细胞，消化后接种细胞于96孔板中，每空5000个细胞，每组设6个复孔，置37℃、5% CO2培育箱中培育。在未接种细胞的孔中参加RPMI-1640培育基中作为调零孔。接种72 h后，每孔加20 μL MTS检测试剂，37℃孵育2 h，用酶标仪测定492 nm波长吸光度值（OD492）。试验重复3次。
1.5 统计学处理
选用SPSS 13.0软件进行统计学剖析。一切成果均以均数±标准差（x±s）标明，两组间比较选用t查验，P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 胃癌及其相应癌旁安排中miR-26a表达水平剖析
qRT-PCR成果显现，miR-26a在71例胃癌安排中的表达为（0.49±0.11），在71例胃癌癌旁正常安排中表达为（1.12±0.20），两者比较下调0.44倍，差异具有统计学含义（P =0.008）。
2.2 miR-26a对胃癌AGS细胞中MTDH蛋白表达的影响
研讨已标明MTDH是miR-26a的靶基因，为了清晰miR-26a对胃癌AGS细胞MTDH的蛋白质表达的调控效果，将miR-26a 模仿物转染胃癌AGS细胞，以转染miR-26a-对照为阴性对照，转染MTDH siRNA为阳性对照，转染48 h后搜集蛋白。Western blot检测成果显现，转染miR-26a模仿物组和MTDH siRNA组MTDH蛋白表达水平较阴性对照组显着下降（图1）。成果提示，miR-26a能下调胃癌AGS细胞系中MTDH蛋白质的表达。
2.3 miR-26a对胃癌细胞增殖才能的影响
分别将miR-26a-模仿物，miR-26a-对照（阴性对照组）和MTDH siRNA以及siRNA-对照（阴性对照组）转入AGS细胞24、48、72 h后，经过MTT法检测其对细胞增殖活性的影响。成果显现，转染MTDH siRNA和miR-26a 模仿物组AGS细胞从48 h起OD值分别为（0.158±0.006）、（0.201±0.006），其增殖速度显着减慢，与miR-26a 对照组细胞比较（0.515±0.032）、（0.479±0.028），差异均有统计学含义（P<0.05），提示高表达miR-26a经过下调MTDH的表达，然后按捺胃癌AGS细胞的成长增殖。
3评论
胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率居第四位，死亡率居第二位[6]。其间，大约60%的胃癌患者发作在东亚（首要在我国）。在我国，大约2/3的胃癌患者开展成为晚期或转移性癌症，超越一半的患者在彻底治愈性手术后复发，而这些患者的生计期一般为6～9个月[7]。跟着生活水平的进步、内窥镜的使用以及多形式的医治计划的施行，近几十年来胃癌的发病率和死亡率有所下降，可是晚期胃癌的死亡率依然居高不下。鉴于现在的情况，有效地前期生物标志物的判定以及高效低毒药物的开发成为燃眉之急。
胃癌的发作开展是一个多要素、多进程、多阶段的病理进程，触及许多相关癌基因和抑癌基因的改变。虽然现在在遗传学和分子生物学等方面进行了广泛的研讨，可是现在关于胃癌的发作开展机制依然知之甚少。这可能是因为胃癌是一种遗传异质性疾病，经过不同的途径所造成的。miRNA表达谱研讨标明，其在不同类型的肿瘤中表达水平各异。研讨证明，反常的miRNA基因往往坐落癌症相关的基因突变位点，说明miRNA参加癌症的发作开展。研讨标明，不同的miRNA参加胃癌开展进程中的不同安排学类型和疾病开展的不同阶段，如miR-105、miR-100、miR-125b、miR-199a、miR-99a、miR-143、miR-145、miR-133a 在弥漫型胃癌中表达上调，而miR-373*， miR-498， miR-202*， miR-494 在肠型胃癌中表达上调[8]。在未分解的胃癌安排中， miR-34b、miR-34c、miR-128a 显着上调， 而miR-128b、miR-129、miR-148却表达下调。现在有关miR-26a在肿瘤中效果的研讨报导很少。研讨标明miR-26a在肝癌中下调，其表达水平与肝癌患者生计时刻及对搅扰素医治的敏理性相关[3]。miR-26a在鼻咽癌中表达下调且能经过靶基因EZH2按捺鼻咽癌细胞成长和致瘤性[4]。一起miR-26a能显着按捺乳腺癌细胞增殖成长，诱导乳腺癌细胞凋亡[9]。进一步研讨发现miR-26a可经过靶向MTDH按捺乳腺癌细胞的成长增殖[10]。MTDH开始是在胎儿胶质细胞瘤中发现，是一个HIV诱导的基因，而且作为癌基因参加多种肿瘤的发作开展。研讨证明MTDH在多种恶性肿瘤中表达上调，而且经过PI3K-AKT、NF-κB、MAPK以及Wnt/β-catenin信号途径参加肿瘤发作的多种生物学进程[11]。
综上所述，miR-26a在胃癌细胞中表达下调，并经过直接靶向调控MTDH的表达发挥生物学效果，咱们将持续深化miR-26a在胃癌中的功用和分子研讨，体系说明miR-26a参加胃癌发作开展的可能分子机制，为胃癌的医治供给新的医治靶点。
[参考文献]
[1] Tang H，Deng M，Tang Y，et al. miR-200b and miR-200c as prognostic factors and mediators of gastric cancer cell progression[J]. Clin Cancer Res，2013，19（20）：5602-5612.
[2] Tang H，Kong Y，Guo J，et al. Diallyl disulfide suppresses proliferation and induces apoptosis in human gastric cancer through Wnt-1 signaling pathway by up-regulation of miR-200b and miR-22[J]. Cancer Letters，2013，340（5）：72-81.
[3] Ji J，Shi J，Budhu A，et al. MicroRNA expression， survival， and response to interferon in liver cancer[J]. N Engl J Med，2009，361（5）：1437-1447.
[4] Lu J，He ML，Wang L，et al. miR-26a inhibits cell growth and tumorigenesis of nasopharyngeal carcinoma through repression of EZH2[J]. Cancer Res，2011，71（1）：225-233.
[5] Gaedcke J，Grade M，Camps J，et al. The rectal cancer microRNAome-microRNA expression in rectal cancer and matched normal mucosa[J]. Clin Cancer Res，2012，18（18）：4919-4930.
[6] Guggenheim DE，Shah MA. Gastric cancer epidemiology and risk factors[J]. J Surg Oncol，2013，107（3）：230-236.
[7] Gao M，Yin H，Fei ZW. Clinical application of microRNA in gastric cancer in Eastern Asian area[J]. World J Gastroenterol，2013，19（13）：2019-2027.
[8] Ueda T，Volinia S，Okumura H，et al. Relation between microRNA expression and progression and prognosis of gastric cancer：A microRNA expression analysis[J]. Lancet Oncol，2010，11（1）：136-146.
[9] Gao J，Li L，Wu M，et al. miR-26a Inhibits proliferation and migration of breast cancer through repression of MCL-1[J]. PLoS One，2013，8（12）：e651
[10] Zhang B，Liu XX，He JR，et al. Pathologically decreased miR-26a antagonizes apoptosis and facilitates carcinogenesis by targeting MTDH and EZH2 in breast cancer[J]. Carcinogenesis，2011，32（1）：2-9.
[11] Butowski NA，Sneed PK，Chang SM. Diagnosis and treatment of recurrent high-grade astrocytoma[J]. J Clin Oncol，2006，24（8）：1273-1280.
（收稿日期：2014-04-24）
胃癌的发作开展是一个多要素、多进程、多阶段的病理进程，触及许多相关癌基因和抑癌基因的改变。虽然现在在遗传学和分子生物学等方面进行了广泛的研讨，可是现在关于胃癌的发作开展机制依然知之甚少。这可能是因为胃癌是一种遗传异质性疾病，经过不同的途径所造成的。miRNA表达谱研讨标明，其在不同类型的肿瘤中表达水平各异。研讨证明，反常的miRNA基因往往坐落癌症相关的基因突变位点，说明miRNA参加癌症的发作开展。研讨标明，不同的miRNA参加胃癌开展进程中的不同安排学类型和疾病开展的不同阶段，如miR-105、miR-100、miR-125b、miR-199a、miR-99a、miR-143、miR-145、miR-133a 在弥漫型胃癌中表达上调，而miR-373*， miR-498， miR-202*， miR-494 在肠型胃癌中表达上调[8]。在未分解的胃癌安排中， miR-34b、miR-34c、miR-128a 显着上调， 而miR-128b、miR-129、miR-148却表达下调。现在有关miR-26a在肿瘤中效果的研讨报导很少。研讨标明miR-26a在肝癌中下调，其表达水平与肝癌患者生计时刻及对搅扰素医治的敏理性相关[3]。miR-26a在鼻咽癌中表达下调且能经过靶基因EZH2按捺鼻咽癌细胞成长和致瘤性[4]。一起miR-26a能显着按捺乳腺癌细胞增殖成长，诱导乳腺癌细胞凋亡[9]。进一步研讨发现miR-26a可经过靶向MTDH按捺乳腺癌细胞的成长增殖[10]。MTDH开始是在胎儿胶质细胞瘤中发现，是一个HIV诱导的基因，而且作为癌基因参加多种肿瘤的发作开展。研讨证明MTDH在多种恶性肿瘤中表达上调，而且经过PI3K-AKT、NF-κB、MAPK以及Wnt/β-catenin信号途径参加肿瘤发作的多种生物学进程[11]。
综上所述，miR-26a在胃癌细胞中表达下调，并经过直接靶向调控MTDH的表达发挥生物学效果，咱们将持续深化miR-26a在胃癌中的功用和分子研讨，体系说明miR-26a参加胃癌发作开展的可能分子机制，为胃癌的医治供给新的医治靶点。
[参考文献]
[1] Tang H，Deng M，Tang Y，et al. miR-200b and miR-200c as prognostic factors and mediators of gastric cancer cell progression[J]. Clin Cancer Res，2013，19（20）：5602-5612.
[2] Tang H，Kong Y，Guo J，et al. Diallyl disulfide suppresses proliferation and induces apoptosis in human gastric cancer through Wnt-1 signaling pathway by up-regulation of miR-200b and miR-22[J]. Cancer Letters，2013，340（5）：72-81.
[3] Ji J，Shi J，Budhu A，et al. MicroRNA expression， survival， and response to interferon in liver cancer[J]. N Engl J Med，2009，361（5）：1437-1447.
[4] Lu J，He ML，Wang L，et al. miR-26a inhibits cell growth and tumorigenesis of nasopharyngeal carcinoma through repression of EZH2[J]. Cancer Res，2011，71（1）：225-233.
[5] Gaedcke J，Grade M，Camps J，et al. The rectal cancer microRNAome-microRNA expression in rectal cancer and matched normal mucosa[J]. Clin Cancer Res，2012，18（18）：4919-4930.
[6] Guggenheim DE，Shah MA. Gastric cancer epidemiology and risk factors[J]. J Surg Oncol，2013，107（3）：230-236.
[7] Gao M，Yin H，Fei ZW. Clinical application of microRNA in gastric cancer in Eastern Asian area[J]. World J Gastroenterol，2013，19（13）：2019-2027.
[8] Ueda T，Volinia S，Okumura H，et al. Relation between microRNA expression and progression and prognosis of gastric cancer：A microRNA expression analysis[J]. Lancet Oncol，2010，11（1）：136-146.
[9] Gao J，Li L，Wu M，et al. miR-26a Inhibits proliferation and migration of breast cancer through repression of MCL-1[J]. PLoS One，2013，8（12）：e651
[10] Zhang B，Liu XX，He JR，et al. Pathologically decreased miR-26a antagonizes apoptosis and facilitates carcinogenesis by targeting MTDH and EZH2 in breast cancer[J]. Carcinogenesis，2011，32（1）：2-9.
[11] Butowski NA，Sneed PK，Chang SM. Diagnosis and treatment of recurrent high-grade astrocytoma[J]. J Clin Oncol，2006，24（8）：1273-1280.
（收稿日期：2014-04-24）
胃癌的发作开展是一个多要素、多进程、多阶段的病理进程，触及许多相关癌基因和抑癌基因的改变。虽然现在在遗传学和分子生物学等方面进行了广泛的研讨，可是现在关于胃癌的发作开展机制依然知之甚少。这可能是因为胃癌是一种遗传异质性疾病，经过不同的途径所造成的。miRNA表达谱研讨标明，其在不同类型的肿瘤中表达水平各异。研讨证明，反常的miRNA基因往往坐落癌症相关的基因突变位点，说明miRNA参加癌症的发作开展。研讨标明，不同的miRNA参加胃癌开展进程中的不同安排学类型和疾病开展的不同阶段，如miR-105、miR-100、miR-125b、miR-199a、miR-99a、miR-143、miR-145、miR-133a 在弥漫型胃癌中表达上调，而miR-373*， miR-498， miR-202*， miR-494 在肠型胃癌中表达上调[8]。在未分解的胃癌安排中， miR-34b、miR-34c、miR-128a 显着上调， 而miR-128b、miR-129、miR-148却表达下调。现在有关miR-26a在肿瘤中效果的研讨报导很少。研讨标明miR-26a在肝癌中下调，其表达水平与肝癌患者生计时刻及对搅扰素医治的敏理性相关[3]。miR-26a在鼻咽癌中表达下调且能经过靶基因EZH2按捺鼻咽癌细胞成长和致瘤性[4]。一起miR-26a能显着按捺乳腺癌细胞增殖成长，诱导乳腺癌细胞凋亡[9]。进一步研讨发现miR-26a可经过靶向MTDH按捺乳腺癌细胞的成长增殖[10]。MTDH开始是在胎儿胶质细胞瘤中发现，是一个HIV诱导的基因，而且作为癌基因参加多种肿瘤的发作开展。研讨证明MTDH在多种恶性肿瘤中表达上调，而且经过PI3K-AKT、NF-κB、MAPK以及Wnt/β-catenin信号途径参加肿瘤发作的多种生物学进程[11]。
综上所述，miR-26a在胃癌细胞中表达下调，并经过直接靶向调控MTDH的表达发挥生物学效果，咱们将持续深化miR-26a在胃癌中的功用和分子研讨，体系说明miR-26a参加胃癌发作开展的可能分子机制，为胃癌的医治供给新的医治靶点。
[参考文献]
[1] Tang H，Deng M，Tang Y，et al. miR-200b and miR-200c as prognostic factors and mediators of gastric cancer cell progression[J]. Clin Cancer Res，2013，19（20）：5602-5612.
[2] Tang H，Kong Y，Guo J，et al. Diallyl disulfide suppresses proliferation and induces apoptosis in human gastric cancer through Wnt-1 signaling pathway by up-regulation of miR-200b and miR-22[J]. Cancer Letters，2013，340（5）：72-81.
[3] Ji J，Shi J，Budhu A，et al. MicroRNA expression， survival， and response to interferon in liver cancer[J]. N Engl J Med，2009，361（5）：1437-1447.
[4] Lu J，He ML，Wang L，et al. miR-26a inhibits cell growth and tumorigenesis of nasopharyngeal carcinoma through repression of EZH2[J]. Cancer Res，2011，71（1）：225-233.
[5] Gaedcke J，Grade M，Camps J，et al. The rectal cancer microRNAome-microRNA expression in rectal cancer and matched normal mucosa[J]. Clin Cancer Res，2012，18（18）：4919-4930.
[6] Guggenheim DE，Shah MA. Gastric cancer epidemiology and risk factors[J]. J Surg Oncol，2013，107（3）：230-236.
[7] Gao M，Yin H，Fei ZW. Clinical application of microRNA in gastric cancer in Eastern Asian area[J]. World J Gastroenterol，2013，19（13）：2019-2027.
[8] Ueda T，Volinia S，Okumura H，et al. Relation between microRNA expression and progression and prognosis of gastric cancer：A microRNA expression analysis[J]. Lancet Oncol，2010，11（1）：136-146.
[9] Gao J，Li L，Wu M，et al. miR-26a Inhibits proliferation and migration of breast cancer through repression of MCL-1[J]. PLoS One，2013，8（12）：e651
[10] Zhang B，Liu XX，He JR，et al. Pathologically decreased miR-26a antagonizes apoptosis and facilitates carcinogenesis by targeting MTDH and EZH2 in breast cancer[J]. Carcinogenesis，2011，32（1）：2-9.
[11] Butowski NA，Sneed PK，Chang SM. Diagnosis and treatment of recurrent high-grade astrocytoma[J]. J Clin Oncol，2006，24（8）：1273-1280.
（收稿日期：2014-04-24）
