黄建新+黄建平+张旸+张黎仙+杨坤荣+陈清泉
[摘要] 意图 了解福建汉族人群肽酰脯氨酰基顺反异构酶1（Pin1）基因rs2233678（-842G/C）和rs2233679（-667T/C）多态性散布规则及其与肺癌发作、开展的联系。 办法 选用聚合酶链反响（PCR）技能，对80例汉族肺癌患者和135例健康对照的Pin1基因发动子进行扩增并对PCR产品直接测序，剖析Pin1基因发动子多态性与肺癌易理性及其临床病理学特征的联系。 成果 rs2233678位点只检测到GG和GC两种基因型，没有检测到CC基因型。rs2233678和rs2233679位点的等位基因和基因型散布在肺癌组和健康对照组中比较差异无计算学含义（P>0.05）；其组成的单体型C-C、G-C和G-T均与肺癌发作危险无相关性（P>0.05），rs2233678的基因型散布与肺癌的临床病理学特征无相关性（P>0.05），rs2233679的基因型散布与肺癌病理类型呈弱相关（r=0.285，P=0.010）。 定论 rs2233678和rs2233679多态性可能与福建汉族人群肺癌易理性无关，rs2233679的基因型散布与肺癌病理类型有必定的相关性。
[要害词] 肺癌；肽酰脯氨酰基顺反异构酶1；多态性；易理性
[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）10（c）-0004-04
肽酰脯氨酰基顺反异构酶1（peptidyl-prolyl cis-trans isomerase NIMA-interacting 1，Pin1）是一种高度保存、特异的肽脯氨酰基顺反异构酶，能特异性地催化磷酸化丝/苏-脯氨酸基序发作顺反异构，影响许多癌基因信号通路中β-catenin[1]、NF-кB[2]等要害蛋白的活性和稳定性，在细胞增殖和肿瘤发作、开展中起重要作用[3]，被以为是一种新的肿瘤预后因子和抗癌医治的靶标[3-6]。Pin1基因多态性的研讨首要会集在发动子区的-842G/C（rs2233678）和-667T/C（rs2233679）两个多态性位点上。流行病学研讨显现，Pin1基因多态性与乳腺癌、肝癌、肺癌、食管癌、头颈部鳞癌及喉部鳞癌等多种肿瘤易理性密切相关，但研讨成果存在显着的不合：有些研讨者以为，-842G/C的C基因变异是肿瘤发作的维护因子，能够下降亚洲人和白种人群头颈部鳞癌、肺癌和乳腺癌的发病危险[7-11]；有些研讨显现，-667T基因能够显着下降亚洲人群的肿瘤易理性[8]；还有研讨以为-842G/C[12]和-667T/C[7，10-12]与肿瘤的易理性无关。至今仍未见Pin1基因多态性与福建区域汉族人群肺癌易理性的报导，因而，为清晰Pin1基因多态性与肺癌易理性和临床病理特征的联系，本研讨对福建汉族肺癌患者Pin1基因的rs2233678（-842G/C）和rs2233679（-667T/C）多态性位点进行剖析。
1 材料与办法
1.1 一般材料
搜集2013年7～12月在本院住院并手术确诊的80例肺癌患者作为肺癌组，其间男性52例（65.0%），女人28例（35.0%）；平均年纪为（59.1±11.8）岁；腺癌54例（67.5%），鳞癌17例（21.3%），其他类型肺癌9例（11.2%）。一起选取同期135例体检正常者作为健康对照组，其间男性79例（58.5%），女人56例（41.5%）；平均年纪为（57.6±11.3）岁。两组的年纪、性别比较差异无计算学含义（P>0.05），具有可比性。一切研讨目标均为出世并长时间生活在福建区域的汉族人。
1.2 检测办法
1.2.1 基因组DNA抽提 知情赞同后，取患者及健康对照外周静脉血2 ml，EDTA抗凝。一切标本置入-20℃保存备用或立即按试剂盒操作过程进行DNA提取。全血基因组DNA抽提试剂盒由北京康为世纪生物科技有限公司供给。
1.2.2 PCR引物及PCR反响 运用Primer 5.0软件自行设计引物，上游引物：5′-AGGGTTCTATGCTAGGTGAACTG-3′；下流引物：5′-TATTGGCTAGACGCGCTCTG-3′（生工生物工程上海股份有限公司组成），该引物扩增产品为919 bp，包括Pin1基因发动子区-842G/C（rs2233678）和-667T/C（rs2233679）区域。依据文献[13]制造PCR反响系统，在ABI 2720型PCR仪上95℃预变性5 min后，进行95℃ 30 s→55℃ 30 s→72℃ 1 min，循环35次，72℃再延伸10 min。1.5%的琼脂糖凝胶电泳调查成果。
1.2.3 PCR产品纯化和收回 运用一般琼脂糖凝胶DNA收回试剂盒（天根生化科技有限公司），按运用说明操作，进行PCR产品的纯化和收回。
1.2.4 测序 纯化后的PCR产品用全自动测序仪（ABI377型，Applied Biosystems公司）进行测序。
1.2.5 临床病理材料搜集 搜集一切肺癌患者的病理安排类型及TNM分期等材料，并记载一切研讨目标的年纪、性别等一般材料。
1.3 计算学处理
选用SPSS 18.0计算软件对数据进行剖析和处理，计量材料以x±s表明，选用t查验，计数材料选用χ2查验，相关性强度选用Spearman相关剖析，以P<0.05为差异有计算学含义。
2 成果
2.1 Pin1基因rs2233678和rs2233679位点的各基因型
对80例肺癌组和135例健康对照组的Pin1基因rs2233678和rs2233679位点进行测序剖析，rs2233678位点只检测到GG和GC两种基因型，未检测到CC基因型；rs2233679位点TT、TC和TT三种基因型均可检测到。rs2233678和rs2233679位点的各基因型见图1。
2.2 Pin1基因rs2233678和rs2233679基因型频率、单体型频率及其与肺癌易理性的联系
肺癌组和健康对照组中Pin1基因rs2233678和rs2233679位点基因型频率散布契合Hardy-Weinberg遗传平衡规则；rs2233678和rs2233679等位基因、基因型和单体型频率在肺癌组和健康对照组中比较差异无计算学含义（P>0.05）（表1）。
2.3 Pin1基因rs2233678和rs2233679基因型与肺癌临床病理学特征的联系
Pin1基因rs2233678基因型频率与病理类型、TNM分期无关（P>0.05）；rs2233679基因型频率与病理类型呈弱相关（r=0.285，P=0.010）（表2、表3）。
3 评论
Pin1基因定坐落19p13，编码含163个氨基酸残基的核蛋白Pin1，相对分子量为18，包括两个功用结构域：N端的WW区和C端的肽基脯氨酰异构酶活性区[3]。Pin1在许多肿瘤中高表达[14-15]，不只能够引起多条肿瘤信号通路要害蛋白的构象变化[2]，并且影响DNA的损害修正[16]，在肿瘤的发作、开展中起重要作用。
本研讨初次描绘了福建汉族人群Pin1基因rs2233678和rs2233679位点的多态性散布规则，发现rs2233678和rs2233679位点的等位基因、基因型散布及其单体型均与肺癌危险无关，rs2233679基因型散布与肺癌的病理类型仅呈弱相关，与Naidu等[12]对乳腺癌的研讨根本共同。与本研讨成果不共同的是Lu等[11]发现rs2233678的C基因变异显着下降患肺癌的危险，进一步的功用研讨发现C基因变异能够下降转录活性；Zhu等[8]发现rs2233679的T基因型显着下降亚洲人的患癌易理性。相关研讨发现rs2233679多态性与患癌危险无关[7，11]。研讨成果不共同，一方面可能是样本量的巨细不同所造成的，另一方面可能是不同区域的患者可能有不同的种族或遗传布景所造成的[11，17]。这些差异可能会改动多态性位点的等位基因和基因型频率在病例组和对照组中的散布，进而影响多态性位点与患癌危险的计算效能，因而，有必要进行多区域、多种族的大样本量研讨来进一步证明Pin1基因多态性与肺癌易理性的联系。
综上所述，Pin1基因rs2233678和rs2233679位点多态性可能与福建汉族肺癌危险无关，rs2233679的基因型散布与肺癌病理类型有必定的相关性，这为Pin1多态性与肿瘤易理性的研讨丰厚了数据，也为无法手术的肺癌患者的病理类型估测供给了思路。当然，因为本研讨的样本量有限，也没有进行rs2233678和rs2233679基因型与Pin1表达量及活性的研讨，因而，有关Pin1基因多态性与肺癌易理性仍有待于进一步深入研讨。
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（收稿日期：2014-08-11 本文修改：李亚聪）
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（收稿日期：2014-08-11 本文修改：李亚聪）
