痔速宁片:HPLC—ELSD法一起测定痔速宁片中鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸的含量

新闻
中国现代医生
2018年11月23日 22:03

戚继红+++沈伟

[摘要] 意图 选用高效液相色谱法-蒸发光散射检测法测定痔速宁片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量。 办法 选用Thermo U-3000液相色谱体系;ChromeleonTM 7工作站;ELSD 2000ES检测器,检测器条件:漂移管温度:105℃,碰击管封闭,增益为1,气体流速:2.0 L/min。选用Thermo(4.6×150 mm,C18 5 μm 120 A)色谱柱;活动相:乙腈-0.1%冰醋酸(50∶50);流速:0.9 mL/min;柱温:20℃。成果 标明猪去氧胆酸在(21.530~262.884)μg/mL(r=0.9997),鹅去氧胆酸在(11.148~133.776)μg/mL(r=0.9995)的规模内呈杰出的线性关系;猪去氧胆酸均匀加样回收率为101.8%(n=9),RSD=2.8%;鹅去氧胆酸均匀加样回收率为98.0%(n=9),RSD=2.3%。 定论 本办法操作简洁、精确、灵敏度高,可用于痔速宁片的质量操控。

[关键词] 高效液相色谱法-蒸发光散射检测法;痔速宁片;猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸;含量测定

[中图分类号] R286.0 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2014)26-0064-03

痔速宁片由猪胆膏、白蔹、槐花、五倍子、黑豆等中药组方而成,具有解毒消炎、止血止痛、退肿通便、缩短痔核之成效。临床用于医治内痔、外痔、混合痔等[1]。本制剂收载于《中华人民共和国卫生部药品规范中药成方制剂第五册》WS3-B-1026-91,猪胆具有清热、润燥、解毒、止咳平喘之成效,首要含有猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆红素等活性成分[2]。该规范没有对猪胆膏的有效成分进行相关质量操控,为了更好地操控该产品质量,本文选用高效液相色谱法-蒸发光散射检测法一起测定痔速宁片中猪胆膏的首要成分猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量,该办法精确、安稳、灵敏度高,可用于痔速宁片的质量操控。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Thermo U-3000液相色谱体系;ChromeleonTM 7工作站;ELSD 2000ES检测器;超声波清洗器(上海吉理超声议有限公司,类型:JL-360DT);XS105DU电子天平(0.1 mg;0.01 mg);HC-3018台式高速离心机;SHY-2A恒温水浴振荡器。

1.2 试药

鹅去氧胆酸化学对照品(来历:我国药品生物制品检定所,批号:110806-200704;供含量测定用);猪去氧胆酸(国家药品规范物质,购自我国药品生物制品检定所,批号:100087-200610;供含量测定用,供HPLC法测定时含量为97.3%);痔速宁片(吉林省辉南辉发制药股份有限公司,批号:20120507、20120604、20120701、201305 06); 乙腈为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为剖析纯。

2 办法与成果

2.1色谱条件及体系适用性试验[3-5]

Thermo(4.6×150 mm,C18 5 μm 120 A)色谱柱;活动相:乙腈-0.1%冰醋酸(50∶50);流速:0.9 mL/min;柱温:20℃。进样量:10 μL。检测器条件:漂移管温度:105℃;增益为1;碰击管封闭;气体流速:2.0 L/min;两主峰别离度大于1.5,理论板数按猪去氧胆酸核算大于10000。

2.2 混合对照溶液的制备

取猪去氧胆酸55.32 mg,鹅去氧胆酸27.87 mg,同置于25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得每毫升中含猪去氧胆酸2153.0 μg、含鹅去氧胆酸1114.8 μg的混合溶液,作为混合对照储藏液[6]。

2.3 供试品溶液的制备

取本品10片,除掉包衣,精细称定,研细,取细粉适量,置100 mL锥形瓶中,加10%氢氧化钠10 mL,用牛皮纸将瓶口盖上,置灭菌锅中,于120℃、压力103 kPa下加热4 h,放冷,离心,上清液移至100 mL量瓶中,药渣加水3 mL,震动洗刷,离心,取上清液再重复洗刷两次,洗液并入量瓶中,用盐酸调理pH至6~7,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

2.4 样品阴性对照溶液

2.5 办法学调查

2.5.1线性[7,8] 别离量取混合对照储藏液0.5、1.0、2.0、5.0、6.0 mL,置50 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,注入液相色谱仪,记载色谱图,以各自峰面积的自然对数和浓度自然对数进行线性回归,回归方程别离为猪去氧胆酸:Y=1.2746X-1.9468(r=0.9997);鹅去氧胆酸回归方程: Y=1.1628X-1.6415(r=0.9995),猪去氧胆酸线性规模为(21.530~262.884)μg/mL,鹅去氧胆酸线性规模为(11.148~133.776)μg/mL。

2.5.2精细度试验 取混合对照储藏液5.0 mL,置50 mL量瓶中,得对照溶液,10 μL对照溶液进样,接连5次,猪去氧胆酸对照品峰面积别离为133.306、135.260、134.062、134.619、134.399,RSD=0.54%;鹅去氧胆酸对照品峰面积别离为45.986、45.500、46.458、47.465、46.110, RSD=1.6%。

2.5.3 安稳性试验[9] 取痔速宁片(批号:20120507)按“2.2”中制备办法制得供试品溶液,别离在0、2、4、6、8、10、12、14、16、18 h进样测验,记载色谱图,成果猪去氧胆酸峰面积自然对数的RSD为0.3%,鹅去氧胆酸峰面积自然对数的RSD为1.0%。

2.5.4 重复性试验 取痔速宁片按2.2.2制备办法制得供试品溶液共6份,各进样2次,成果猪去氧胆酸的均匀含量为14.8601 mg/g,RSD为1.5%,鹅去氧胆酸的均匀含量为12.2313 mg/g,RSD为1.8%。endprint

2.5.5 加样回收率试验[10] 称取痔速宁(批号:20120507),别离精细参加含猪去氧胆酸194.6 μg/mL、含鹅去氧胆酸189.0 μg/mL的混合对照品溶液3.2、4.0、4.8 mL,置于25 mL量瓶中,按“2.2”中制备办法得加样回收率试验溶液,注入液相色谱仪

2.6 样品的测定

3 评论

现在,《中华人民共和国药典》收载规范,如猪胆粉、藿胆丸等,多以薄层扫描法测定猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸。因为猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸属甾体类物质,均为紫外结尾吸收,不适合用紫外检测器测定,因而选用ELSD 检测器检测。

作为猪胆汁首要有效成分,许多研讨检测胆酸、猪去氧胆酸或胆酸、鹅去氧胆酸,也有一起测定猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的相关报导,本文选用专特点更强、灵敏度更高、操作简略的HPLC-ELSD 法对速痔宁片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸进行了测定,并对含量测定办法进行了体系试验调查,成果标明该办法成果精确,重复性好,可有效地操控该制剂的质量。

检测条件优化及柱温:有文献报导选用30℃、40℃的柱温,经过试验比较,升高柱温,别离作用、峰形及面积并没有改进,本文选用20℃的柱温即到达满足作用;漂移管温度:经过试验比较105℃、95℃[11],成果105℃时峰面积到达最大;在色谱条件挑选的过程中,经试验挑选乙腈-0.1%冰醋酸(50∶50)为活动相,流速为0.9 mL/min别离度大于1.5,样品中其他成分对二者无搅扰。

[参考文献]

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品规范中药成方制剂第四册[S]. 1991:136-137.

[2] 唐元军,陈育琳,陈庆辉. HPLC-ELSD法一起测定猪胆粉中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量[J]. 中药新药与临床药理,2010,21(6):651-653.

[3] 国家药典委. 我国药典,2010年版一部[S]. 北京:我国医药科技出版社,2010:1236.

[4] 李志万,马强,袁永生,等. HPLC-ELSD法对猪胆粉中猪去氧胆酸的含量测定研讨[J]. 我国试验方剂学杂志,2005,11(5):14.

[5] 杨力伟,刘潇潇,巩珺,等. 清开灵系列种类中胆酸和猪去氧胆酸的通用检测办法研讨[J].我国药房,2012,23(35):3340-3342.

[6] 麦意梅,于永洲. 霍胆丸中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定[J]. 时珍国医国药,2010,21(10):2702-2703.

[7] 盛燕,陆静娴,赵卫民,等. 胆酸止咳片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定[J]. 医药导报,2013,32(12):1645-1647.

[8] 张鹏威,苏文琴,柳树,等. 高效液相-蒸发光散射法测定藿胆滴丸中猪去氧胆酸含量[J]. 医药导报,2011,30(3):377-378.

[9] 江英桥. HPLC-ELSD 法测定清开灵注射液中胆酸和猪去氧胆酸的含量[J]. 我国药品规范,2006,7(4):31-33.

[10] 谢志宏,周焘,汪晓凌,等. HPLC- EL SD 法测定清开灵栓中胆酸和猪去氧胆酸的含量[J]. 我国药房,2009, 20(9):696-697.

[11] 娄玉霞,聂桂华,刘乃强. HPLC-ELSD法测定痰热清注射液中黄芩苷、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸3种成分的含量[J]. 我国中药杂志,2009,34(14):1862-1864.

(收稿日期:2014-04-18)endprint

2.5.5 加样回收率试验[10] 称取痔速宁(批号:20120507),别离精细参加含猪去氧胆酸194.6 μg/mL、含鹅去氧胆酸189.0 μg/mL的混合对照品溶液3.2、4.0、4.8 mL,置于25 mL量瓶中,按“2.2”中制备办法得加样回收率试验溶液,注入液相色谱仪

2.6 样品的测定

3 评论

现在,《中华人民共和国药典》收载规范,如猪胆粉、藿胆丸等,多以薄层扫描法测定猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸。因为猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸属甾体类物质,均为紫外结尾吸收,不适合用紫外检测器测定,因而选用ELSD 检测器检测。

作为猪胆汁首要有效成分,许多研讨检测胆酸、猪去氧胆酸或胆酸、鹅去氧胆酸,也有一起测定猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的相关报导,本文选用专特点更强、灵敏度更高、操作简略的HPLC-ELSD 法对速痔宁片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸进行了测定,并对含量测定办法进行了体系试验调查,成果标明该办法成果精确,重复性好,可有效地操控该制剂的质量。

检测条件优化及柱温:有文献报导选用30℃、40℃的柱温,经过试验比较,升高柱温,别离作用、峰形及面积并没有改进,本文选用20℃的柱温即到达满足作用;漂移管温度:经过试验比较105℃、95℃[11],成果105℃时峰面积到达最大;在色谱条件挑选的过程中,经试验挑选乙腈-0.1%冰醋酸(50∶50)为活动相,流速为0.9 mL/min别离度大于1.5,样品中其他成分对二者无搅扰。

[参考文献]

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品规范中药成方制剂第四册[S]. 1991:136-137.

[2] 唐元军,陈育琳,陈庆辉. HPLC-ELSD法一起测定猪胆粉中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量[J]. 中药新药与临床药理,2010,21(6):651-653.

[3] 国家药典委. 我国药典,2010年版一部[S]. 北京:我国医药科技出版社,2010:1236.

[4] 李志万,马强,袁永生,等. HPLC-ELSD法对猪胆粉中猪去氧胆酸的含量测定研讨[J]. 我国试验方剂学杂志,2005,11(5):14.

[5] 杨力伟,刘潇潇,巩珺,等. 清开灵系列种类中胆酸和猪去氧胆酸的通用检测办法研讨[J].我国药房,2012,23(35):3340-3342.

[6] 麦意梅,于永洲. 霍胆丸中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定[J]. 时珍国医国药,2010,21(10):2702-2703.

[7] 盛燕,陆静娴,赵卫民,等. 胆酸止咳片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定[J]. 医药导报,2013,32(12):1645-1647.

[8] 张鹏威,苏文琴,柳树,等. 高效液相-蒸发光散射法测定藿胆滴丸中猪去氧胆酸含量[J]. 医药导报,2011,30(3):377-378.

[9] 江英桥. HPLC-ELSD 法测定清开灵注射液中胆酸和猪去氧胆酸的含量[J]. 我国药品规范,2006,7(4):31-33.

[10] 谢志宏,周焘,汪晓凌,等. HPLC- EL SD 法测定清开灵栓中胆酸和猪去氧胆酸的含量[J]. 我国药房,2009, 20(9):696-697.

[11] 娄玉霞,聂桂华,刘乃强. HPLC-ELSD法测定痰热清注射液中黄芩苷、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸3种成分的含量[J]. 我国中药杂志,2009,34(14):1862-1864.

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2.5.5 加样回收率试验[10] 称取痔速宁(批号:20120507),别离精细参加含猪去氧胆酸194.6 μg/mL、含鹅去氧胆酸189.0 μg/mL的混合对照品溶液3.2、4.0、4.8 mL,置于25 mL量瓶中,按“2.2”中制备办法得加样回收率试验溶液,注入液相色谱仪

2.6 样品的测定

3 评论

现在,《中华人民共和国药典》收载规范,如猪胆粉、藿胆丸等,多以薄层扫描法测定猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸。因为猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸属甾体类物质,均为紫外结尾吸收,不适合用紫外检测器测定,因而选用ELSD 检测器检测。

作为猪胆汁首要有效成分,许多研讨检测胆酸、猪去氧胆酸或胆酸、鹅去氧胆酸,也有一起测定猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的相关报导,本文选用专特点更强、灵敏度更高、操作简略的HPLC-ELSD 法对速痔宁片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸进行了测定,并对含量测定办法进行了体系试验调查,成果标明该办法成果精确,重复性好,可有效地操控该制剂的质量。

检测条件优化及柱温:有文献报导选用30℃、40℃的柱温,经过试验比较,升高柱温,别离作用、峰形及面积并没有改进,本文选用20℃的柱温即到达满足作用;漂移管温度:经过试验比较105℃、95℃[11],成果105℃时峰面积到达最大;在色谱条件挑选的过程中,经试验挑选乙腈-0.1%冰醋酸(50∶50)为活动相,流速为0.9 mL/min别离度大于1.5,样品中其他成分对二者无搅扰。

[参考文献]

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品规范中药成方制剂第四册[S]. 1991:136-137.

[2] 唐元军,陈育琳,陈庆辉. HPLC-ELSD法一起测定猪胆粉中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量[J]. 中药新药与临床药理,2010,21(6):651-653.

[3] 国家药典委. 我国药典,2010年版一部[S]. 北京:我国医药科技出版社,2010:1236.

[4] 李志万,马强,袁永生,等. HPLC-ELSD法对猪胆粉中猪去氧胆酸的含量测定研讨[J]. 我国试验方剂学杂志,2005,11(5):14.

[5] 杨力伟,刘潇潇,巩珺,等. 清开灵系列种类中胆酸和猪去氧胆酸的通用检测办法研讨[J].我国药房,2012,23(35):3340-3342.

[6] 麦意梅,于永洲. 霍胆丸中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定[J]. 时珍国医国药,2010,21(10):2702-2703.

[7] 盛燕,陆静娴,赵卫民,等. 胆酸止咳片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定[J]. 医药导报,2013,32(12):1645-1647.

[8] 张鹏威,苏文琴,柳树,等. 高效液相-蒸发光散射法测定藿胆滴丸中猪去氧胆酸含量[J]. 医药导报,2011,30(3):377-378.

[9] 江英桥. HPLC-ELSD 法测定清开灵注射液中胆酸和猪去氧胆酸的含量[J]. 我国药品规范,2006,7(4):31-33.

[10] 谢志宏,周焘,汪晓凌,等. HPLC- EL SD 法测定清开灵栓中胆酸和猪去氧胆酸的含量[J]. 我国药房,2009, 20(9):696-697.

[11] 娄玉霞,聂桂华,刘乃强. HPLC-ELSD法测定痰热清注射液中黄芩苷、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸3种成分的含量[J]. 我国中药杂志,2009,34(14):1862-1864.

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