林秀仙 李菁 陈亮等
[摘要] 意图 优化西藏灵芝多糖的提取工艺。 办法 以蒽酮-硫酸法作为灵芝多糖含量的测定办法，以多糖提获得率为调查目标，对浸提过程中的温度、时刻、次数以及料液比4个要素进行单要素试验和正交试验。 成果 灵芝多糖的最佳提取条件为提取温度100 ℃，浸提时刻2 h，浸提次数3次，料液比为1∶30。 定论 该提取工艺条件安稳，重现性好，可为西藏灵芝多糖的大出产供给参阅根据。
[关键词] 西藏灵芝；多糖；提取工艺；含量测定
[中图分类号] R931.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）04（b）-0008-04
[Abstract] Objective To optimize the extraction process for polysaccharides from Ganoderma lucidum of Tibet. Methods Anthrone-sulphuric acid method was used to dectect the content of polysaccharides，extraction rate of polysaccharides was took as inspection indicator，four factors such as temperature，time，number of times and ratio of material to liquid in the leaching process was conducted single-factor test and orthogonal test. Results The optimum temperature of extracting was 100℃，the optimum times of extracting was 2 times，the optimum extracting time was 2 h and ratio of material to liquid was 1∶30 of Ganoderma lucidum polysaccharides. Conclusion The condition of extracting process are stable and it is reproducible，which can provide reference for preparation of polysaccharides from Ganoderma lucidum of Tibet.
[Key words] Ganoderma lucidum of Tibet；Polysaccharides；Extraction process；Content determination
西藏灵芝Ganoderma lucidum Sheng H. Wu， Y. Cao& Y. C. Dai是广义赤芝Ganoderma lucidum （Curtis） P. Karst.的复合群成员，是目前我国遍及运用的食药用赤芝种类。
本公司选取了3个种属的灵芝[西藏灵芝、西藏野生灵芝（松杉灵芝）Ganoderma tsugae Murrill和紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang]在西藏基地进行试栽培。为了断定西藏灵芝、西藏野生灵芝（松杉灵芝）和紫芝3个种类的哪一种更适宜在本公司的西藏基地成长，展开了灵芝多糖的提取工艺优化研讨，比较不同种类灵芝的成长形状和多糖含量，为西藏基地栽培灵芝供给选种根据。
1 资料与仪器
1.1 资料
西藏灵芝、松杉灵芝、紫芝（广州白云山汉方现代药业有限公司），D-无水葡萄糖对照品（我国药品生物制品检定所，0833-9501），95%乙醇（医用级），水为蒸馏水，其他试剂均为剖析纯。
1.2 仪器
R-201旋转蒸腾仪（上海申科机械研讨所），YZG-1000A型真空干燥机（常州市范群干燥设备有限公司），BS210S型电子天平（德国赛多利斯），UV-2550型紫外分光光度计（日本岛津公司），LXJ-IIB低速大容量多管离心机（上海棱谱仪器仪表有限公司）。
2 办法与成果
2.1 3种灵芝的形状比较和多糖含量的查验
多糖含量查验办法参照我国药典2010年一部灵芝项下测定办法[1]。3种灵芝的形状比较和多糖含量查验成果见图1、表1。从图1和表2可知，在西藏栽培的紫芝可能因为不服水土，发育不良，菌盖不完整，多糖含量也未契合我国药典规范，远低于别的两种；松杉灵芝的菌盖很薄，孢子粉弹射很少，但多糖含量高于别的两种灵芝；西藏灵芝的成长形状最好，多糖含量契合我国药典规范。
2.2 提取工艺研讨[2-14]
多糖常用热水浸提法提取。影响热水浸提法的要素有提取温度、提取时刻、料液比和提取次数等，本研讨对这4个要素别离进行了单要素和正交试验，优化最佳的提取工艺参数。
2.2.1 料液比调查 精细称取灵芝粗粉4份，每份5 g，别离置250 ml圆底烧瓶中，按照顾液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40加水回流提取1 h，滤过，滤液别离定容至250 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，调查不同料液比对多糖提获得率的影响（图2）。从图2可知，跟着料液比的添加，多糖提获得率增高，但当料液比大于1∶30时，多糖提获得率增高不明显。
2.2.2 提取时刻的调查 精细称取灵芝粗粉4份，每份5 g，置150 ml圆底烧瓶中，别离加水125 ml，回流提取1、1.5、2、2.5 h，滤过，滤液别离定容至250 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，调查不同提取时刻对多糖提获得率的影响（图3）。从图3可知，跟着提取时刻的延伸，多糖提获得率逐渐增高，提取2 h即可将灵芝子实体中多糖提取较彻底，这是因为浸渍有利于溶剂浸入细胞壁内，使之充沛溶胀，利于有效成分进入溶剂相中，时刻太长，可能引起结构的改变和损坏，乃至使其间的五碳环或六碳环裂解，导致多糖含量下降。
2.2.3 提取温度的调查 精细称取灵芝粗粉3份，每份5 g，置于250 ml烧杯中，加水200 ml，别离设定温度为60、80、100℃，加热回流提取1次，滤过，滤液别离定容至250 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，调查不同提取温度对多糖提获得率的影响（图4）。从图4可知，提取温度对提取工艺有很大的影响，温度升高，多糖得率敏捷增高，并且多糖的溶解性较差，出产上一般需求沸水才干使其提取彻底，因而，考虑到企业机械化出产的需求，提取温度选用100℃。
2.2.4 提取工艺的正交试验 精细称取灵芝粗粉9份，每份10 g，设定提取温度为100℃，别离按表2 L9（34）正交试验要素水平表的条件进行提取，滤过，滤液定容成500 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，核算多糖搬运率。以多糖搬运率为目标，对料液比、提取时刻和提取次数3个要素进行调查，以断定灵芝多糖的最佳提取条件。多糖搬运率=被提取出来的多糖量（g）/药材量（g）/药材的多糖含量（%）×100%，正交试验规划成果见表3，表4。从表3正交试验成果可知，不同的要素水平组合对多糖提取有必定的影响，其间搬运率最高为99.38%，最低为23.20%。由表4方差剖析表可知，以D要素项为差错项进行方差剖析，成果C要素对成果有明显差异，A、B要素对成果影响甚微。
由直观剖析可知，A、B、C 3要素对多糖搬运率的影响巨细为A
本研讨中单要素试验成果表明，跟着料液比的添加，多糖提获得率增高，当料液比>1∶30时，多糖提获得率增高不明显；多糖提获得率随提取时刻添加而增高，但提取超越2 h后，多糖提获得率出现陡峭趋势；提取温度升高，多糖提获得率也明显增高。正交试验成果表明：西藏灵芝多糖的最佳提取工艺条件为料液比为1∶30，提取时刻为2 h，提取次数为3次。
在灵芝培养基中，跟着灵芝菌丝体的成长和成熟，灵芝多糖的含量逐渐添加，直到开伞期到达最高值，从孢子弹射期后，含量急剧下降[15-16]。本公司在西藏栽培的3种灵芝多糖含量巨细为松杉灵芝>西藏灵芝>紫芝，其间，松杉灵芝因为已彻底开伞，并且几乎没有孢子粉，包子无弹射，因而多糖含量最高，而紫芝因为发育不良，菌伞没开，因而多糖含量最低，因而，在栽培灵芝时，应根据不同意图，需求的是孢子粉仍是灵芝多糖，其采收期也应有所不同。
[参阅文献]
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京：我国医药科技出版社，2010：174-175.
[2] 何滨，李莹，徐志霞.不同区域、种类灵芝的多糖提取工艺优化[J].农技效劳，2013，30（7）：777-778.
[3] 杨晓梅，鲍隆友，耿向永，等.西藏野生灵芝粗多糖提取工艺[J].长江蔬菜·学术版，2010，（22）：41-45.
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[5] 干伟伟，常继东.灵芝多糖的呼应曲面法优化研讨[J].江苏农业科学，2009，37（1）：259-262.
[6] 马明辉，吕丽娟，贡济宇，等.灵芝提取工艺的研讨[J].长春中医药大学学报，2007，23（3）：24-25.
[7] 禹建春，罗向华，吴昌枝，等.灵芝多糖的提取工艺研讨[J].海峡药学，2012，24（8）：25-26
[8] 黄纯，高向东，庞秀炳，等.灵芝多糖的提取工艺优化[J].江苏药学与临床研讨，2005，13（6）：66-67.
[9] 刘春泉，宋江峰，李大婧，等.呼应曲面法优选灵芝实体多糖的提取工艺[J].江苏农业学报，2007，23（3）：239-243.
[10] 陈乃东，陈琼，何健.正交试验优选灵芝多糖的提取工艺[J].安徽农业科学，2013，41（19）：8146-8148.
[11] 周吴萍，杜文佳.灵芝多糖提取工艺的优化[J].湖北农业科学，2013，52（15）：3632-3634.
[12] 闫雪莲.提取灵芝活性多糖最佳工艺研讨[J].我国科技饱览，2012，（30）：275.
[13] 陈凌华，程祖锌，杨志坚，等.灵芝多糖热水提取条件的优化试验[J].浙江食用菌，2009，17（4）：21-23.
[14] 刘英梅，李春华，陈鸿雁.灵芝孢子粉中多糖提取工艺的研讨[J].中成药，2006，28（3）：332-335.
[15] 韦会平，李学刚，蒲盛才，等.灵芝成长过程中灵芝多糖含量改变规则研讨[J].中医药学报，2006，34（5）：10-12.
[16] 史俊青，张丽萍，杨春清，等.不同种类灵芝多糖含量差异研讨[J].我国试验方剂学杂志，2010，16（13）：104-106.
（收稿日期：2014-03-03 本文修改：许俊琴）
2.2.3 提取温度的调查 精细称取灵芝粗粉3份，每份5 g，置于250 ml烧杯中，加水200 ml，别离设定温度为60、80、100℃，加热回流提取1次，滤过，滤液别离定容至250 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，调查不同提取温度对多糖提获得率的影响（图4）。从图4可知，提取温度对提取工艺有很大的影响，温度升高，多糖得率敏捷增高，并且多糖的溶解性较差，出产上一般需求沸水才干使其提取彻底，因而，考虑到企业机械化出产的需求，提取温度选用100℃。
2.2.4 提取工艺的正交试验 精细称取灵芝粗粉9份，每份10 g，设定提取温度为100℃，别离按表2 L9（34）正交试验要素水平表的条件进行提取，滤过，滤液定容成500 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，核算多糖搬运率。以多糖搬运率为目标，对料液比、提取时刻和提取次数3个要素进行调查，以断定灵芝多糖的最佳提取条件。多糖搬运率=被提取出来的多糖量（g）/药材量（g）/药材的多糖含量（%）×100%，正交试验规划成果见表3，表4。从表3正交试验成果可知，不同的要素水平组合对多糖提取有必定的影响，其间搬运率最高为99.38%，最低为23.20%。由表4方差剖析表可知，以D要素项为差错项进行方差剖析，成果C要素对成果有明显差异，A、B要素对成果影响甚微。
由直观剖析可知，A、B、C 3要素对多糖搬运率的影响巨细为A
本研讨中单要素试验成果表明，跟着料液比的添加，多糖提获得率增高，当料液比>1∶30时，多糖提获得率增高不明显；多糖提获得率随提取时刻添加而增高，但提取超越2 h后，多糖提获得率出现陡峭趋势；提取温度升高，多糖提获得率也明显增高。正交试验成果表明：西藏灵芝多糖的最佳提取工艺条件为料液比为1∶30，提取时刻为2 h，提取次数为3次。
在灵芝培养基中，跟着灵芝菌丝体的成长和成熟，灵芝多糖的含量逐渐添加，直到开伞期到达最高值，从孢子弹射期后，含量急剧下降[15-16]。本公司在西藏栽培的3种灵芝多糖含量巨细为松杉灵芝>西藏灵芝>紫芝，其间，松杉灵芝因为已彻底开伞，并且几乎没有孢子粉，包子无弹射，因而多糖含量最高，而紫芝因为发育不良，菌伞没开，因而多糖含量最低，因而，在栽培灵芝时，应根据不同意图，需求的是孢子粉仍是灵芝多糖，其采收期也应有所不同。
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[10] 陈乃东，陈琼，何健.正交试验优选灵芝多糖的提取工艺[J].安徽农业科学，2013，41（19）：8146-8148.
[11] 周吴萍，杜文佳.灵芝多糖提取工艺的优化[J].湖北农业科学，2013，52（15）：3632-3634.
[12] 闫雪莲.提取灵芝活性多糖最佳工艺研讨[J].我国科技饱览，2012，（30）：275.
[13] 陈凌华，程祖锌，杨志坚，等.灵芝多糖热水提取条件的优化试验[J].浙江食用菌，2009，17（4）：21-23.
[14] 刘英梅，李春华，陈鸿雁.灵芝孢子粉中多糖提取工艺的研讨[J].中成药，2006，28（3）：332-335.
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[16] 史俊青，张丽萍，杨春清，等.不同种类灵芝多糖含量差异研讨[J].我国试验方剂学杂志，2010，16（13）：104-106.
（收稿日期：2014-03-03 本文修改：许俊琴）
2.2.3 提取温度的调查 精细称取灵芝粗粉3份，每份5 g，置于250 ml烧杯中，加水200 ml，别离设定温度为60、80、100℃，加热回流提取1次，滤过，滤液别离定容至250 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，调查不同提取温度对多糖提获得率的影响（图4）。从图4可知，提取温度对提取工艺有很大的影响，温度升高，多糖得率敏捷增高，并且多糖的溶解性较差，出产上一般需求沸水才干使其提取彻底，因而，考虑到企业机械化出产的需求，提取温度选用100℃。
2.2.4 提取工艺的正交试验 精细称取灵芝粗粉9份，每份10 g，设定提取温度为100℃，别离按表2 L9（34）正交试验要素水平表的条件进行提取，滤过，滤液定容成500 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，核算多糖搬运率。以多糖搬运率为目标，对料液比、提取时刻和提取次数3个要素进行调查，以断定灵芝多糖的最佳提取条件。多糖搬运率=被提取出来的多糖量（g）/药材量（g）/药材的多糖含量（%）×100%，正交试验规划成果见表3，表4。从表3正交试验成果可知，不同的要素水平组合对多糖提取有必定的影响，其间搬运率最高为99.38%，最低为23.20%。由表4方差剖析表可知，以D要素项为差错项进行方差剖析，成果C要素对成果有明显差异，A、B要素对成果影响甚微。
由直观剖析可知，A、B、C 3要素对多糖搬运率的影响巨细为A
本研讨中单要素试验成果表明，跟着料液比的添加，多糖提获得率增高，当料液比>1∶30时，多糖提获得率增高不明显；多糖提获得率随提取时刻添加而增高，但提取超越2 h后，多糖提获得率出现陡峭趋势；提取温度升高，多糖提获得率也明显增高。正交试验成果表明：西藏灵芝多糖的最佳提取工艺条件为料液比为1∶30，提取时刻为2 h，提取次数为3次。
在灵芝培养基中，跟着灵芝菌丝体的成长和成熟，灵芝多糖的含量逐渐添加，直到开伞期到达最高值，从孢子弹射期后，含量急剧下降[15-16]。本公司在西藏栽培的3种灵芝多糖含量巨细为松杉灵芝>西藏灵芝>紫芝，其间，松杉灵芝因为已彻底开伞，并且几乎没有孢子粉，包子无弹射，因而多糖含量最高，而紫芝因为发育不良，菌伞没开，因而多糖含量最低，因而，在栽培灵芝时，应根据不同意图，需求的是孢子粉仍是灵芝多糖，其采收期也应有所不同。
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[12] 闫雪莲.提取灵芝活性多糖最佳工艺研讨[J].我国科技饱览，2012，（30）：275.
[13] 陈凌华，程祖锌，杨志坚，等.灵芝多糖热水提取条件的优化试验[J].浙江食用菌，2009，17（4）：21-23.
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（收稿日期：2014-03-03 本文修改：许俊琴）
