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谢奇+樊鑫梅
【摘要】目的：构建强力升白片中没食子酸的含量测定方法，以更好控制此产品质量。方法：运用反相高效液相色谱法，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，ALLTIMA C18为色谱柱，检测波长为265nm。结果：当食子酸的进样量处于0.040～0.240μg区间内时，其与峰面积值之间线性关系较好（r=0.9999）。相对标准差（RSD）1.96%，平均加样回收率100.41%。结论：高效液相色谱法准确、可靠，且简便、易操作，可以用作此产品的质量控制。
【关键词】强力升白片；高效液相色谱法；没食子酸；质量
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2017）12-0-02
强力升白片由多种中药组成，如丹参、黄芪、地榆等，具有活血、益气等功效，多用于治疗由化疗、放疗等所造成的白细胞减少，总体效果佳[1]。此产品原为地方品种，当将其更改为部颁品种之后，开始以药方君药地榆中的没食子酸作为主要指标成分，构建了专门用于测定没食子酸含量的高效液相色谱（HPLC）法，为更好控制此产品质量，提供了准确、客观、高效的定量评价方法。
1 仪器与试药
（1）仪器。选用由美国Waters公司生产的高效液相色谱仪（515型）与紫外检测器（2487型）；日本岛津生产的紫外可见分光光度计（UV-2200）；德国Sartorius公司产的万分之一电子天平。（2）试药。选用由中国药品生物制品检定提供的没食子酸，当完成色谱条件的选定及分离后，依据归一化法进行计算，得出没食子酸含量为99.27%，用P2O5干燥器进行减压干燥处理，使其至恒重。所选用乙腈、甲醇，均为色谱純，而诸如磷酸等试剂，则均为分析纯，所用水为重蒸馏水。
2 方法与结果
（1）色谱条件。色谱柱为ALLTIMA C18，250mm×4.6mm，5μm，柱温为30℃。流动相为0.1%磷酸溶液-乙腈-甲醇，比例为89：6：5；灵敏度为0.01AUFS，流速为1.0ml/min，检测波长265nm。（2）确定检测波长。精取适量没食子酸对照品，流动相稀释，即2.0μg/ml，设定流动相为空白，于200～600nm波长区间内，扫描操作。最终结果得知，波长为270nm处，Cur吸收最大。（3）制备标准曲线。取适量对照品（没食子酸），甲醇溶解、稀释，制成储备液（20.0μg/ml），然后分别精取2.0μl、4.0μl、6.0μl、8.0μl、10.0μl与12.0μl，进样，绘制色谱图，完成其峰面积测定工作；然后以峰面积值（A），回归分析进样量（C），最终可得到回归线方程，即A= 1.095×103+2.687×106C，r=0.9999。由此可知，没食子酸进样量处于0.040～0.240μg区间内，其与峰值面积值之间，线性关系较好。（4）制备供试品溶液。取1g重量差异项下内容物，置入烧瓶，加入25ml浓度为50%的甲醇，称重，沸水浴中，回流，提取1h，然后置于室温环境，再次称重，用浓度为50%的甲醇，将减失重量补充，滤过处理后，便得。将色谱条件选定之后，对于没食子酸中以及其它样品中的其它组分色谱峰，可以进行基线分离，分离度>1.5；依据没食子酸峰来进行细致计算，拖尾因子（T）1.01，理论板数（N）>3000，此外，精取阴性供试品，将其放置在没食子酸色谱峰处，未出现色谱峰。（5）精密度试验。精取10μl试品溶液，连续进行5次进样，测出没食子酸峰面积相对标准差（RSD），即0.73%。由实验得知，整体精密度较好。（6）稳定性试验。精取供试液，分别在0h、2 h、4 h、6 h与8 h时，进样10μl，得出没食子酸峰面积值RSD为0.45%。表明，供试液在8h内，有着较好的稳定性。（7）重复性试验。依据上述制定好的含量测定法，分别取5份同一批次的样品，依次制备对应的样品供试液，经检测得知，没食子酸含量RSD为0.70%。（8）回收率实验。分别取已经知道含量的样品（含量为0.2302mg/g），均为0.5g，然后分别将其加入至没食子酸对照品溶液中，没食子酸对照品溶液剂量分别为100μl、200μl、300μl，添加完毕后，进行样品供试液的精确制备，测定没食子酸的含量，最终完成回收率的计算。（9）测定样品。分别对三批中试样品（020207、020208、020209）中进行没食子酸含量与相对标准差的测定，最终结果得知，020207的没食子酸含量为0.0230mg/片，相对标准差为0.59%；020208的没食子酸含量为0.0311mg/片，相对标准差为0.80%；020209的没食子酸含量为0.0325mg/片，相对标准差为0.55%。
3 讨论
有研究[2]分别利用HPLC法、薄层色谱法，对没食子酸含量进行了测定。本次研究曾依据文献，用甲醇-水-N、甲醇-水，将冰醋酸溶液-二甲基甲酰胺- N作为流动相，但最终仍难以较好的对本品中没食子酸含量进行有效分离与准确测定。没食子当中主要为可水解的鞣质，通过加热处理，能够从中提取没食子酸，所以，本次试验选用反相高效液相色谱法，来测定强力升白片中没食子酸的含量。由本次试验得知，将一定量乙腈-浓度为0.1%磷酸溶液-甲醇作为流动相，并对流动相比例、柱温、流速等色谱条件进行适当性优化，能够较好的从本品中将没食子酸峰分离出来，另外，经实验还得知，所构建的高效液相色谱测定方法，在测定地榆药材中没食子酸含量中，同样适用。用不同提取时间（0.5h、1 h、1.5 h与2 h）、不同提取方法（超声或回流）、不同溶剂（50%甲醇、75%甲醇、乙醇、甲醇），提取本品中的没食子酸。最终结果得知，1.0g本品，用25ml浓度为50%的甲醇，回流提取1h，有着良好的提取效果。究其原因，因为地榆中的可水解鞣质，具有较差的稳定性，若放置较长时间，或加热煮沸，便能分解成没食子酸，因此，最终选回流提取。由本次实验整体结果可知，本方法重现性好，而且准确、灵活，可用作此产品、地榆药材中没食子酸含量的测定，便于其质量控制。
综上所述，高效液相色谱法准确、可靠，且简便、易操作，可以用作此产品的质量控制。
参考文献：
胡佳， 王泽宇， 广兵，等. HPLC同时测定地榆升白片中没食子酸和（+）-儿茶素的含量[J]. 中药与临床， 2016， 7（2）：49-51.
方岚， 胡旭佳， 张赟华. RP-HPLC测定叶下珠片中没食子酸的含量[J]. 华西药学杂志， 2004， 19（4）：307-308.
艾尼瓦尔·塔力甫， 莫合拜提江， 艾合买提·买买提. 高效液相色谱法测定苏润江片中没食子酸的含量[J]. 中国民族医药杂志， 2008， 14（3）：68-69.endprint
