朱芹 郭平 黄雅娟等
[摘要] 意图 点评EB病毒抗体VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG、EBNA-IgG及EBV-DNA载量检测在婴儿传染性单核细胞增多症（IM）中的确诊含义。 办法 用ELISA法检测78例IM患儿血清中EBV四种抗体及PCR荧光定量法检测外周血单个核细胞EBV-DNA载量。 成果 在IM急性期VCA-IgM阳性率在<1岁患儿中为27.8%，而≥4岁组患儿中为83.3%。有近20% <1岁患儿一切EBV抗体均阴性，需重复做抗体测定。EBV-DNA载量检测总阳性率为70.5%，<1岁患儿中阳性率为61.1%，<1岁组患儿中有5例，在1岁组患儿中3例前期检测VCA-IgM抗体是阴性，而EBV-DNA载体是阳性的，但在后来的VCA-IgG检测均是阳性的。定论 在婴儿期IM急性阶段，只用血清学办法来确诊不行活络，主张在VCA-IgM阴性的患儿中联合EBV-DNA载量检测，以进步婴幼儿IM临床确诊的敏感性。
[关键词] EB病毒；传染性单核细胞增多症；EBV抗体；EBV-DNA
[中图分类号] R466.6 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）11-0056-03
[Abstract] Objective To evaluation the diagnosis sensitivity of Epstein-Barr virus（EBV） DNA load and four antibodies（VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG、EBNA-IgG） in infantile infectious mononucleosis（IM）. Methods EBV DNA loads of peripheral blood samples from 78 pediatric IM patients were analyzed by fluorescence quantitative polymerase chain reaction（PQ-PCR） as well as Elias method to detect the four antibodies in the serology. Results The anti-viral capsid antigen-IgM（anti-VCA-IgM） positive rate in the acute phase was only 27.8% in infants but 83.3% in patients ≥4 years of age. Nearly twenty percent of the infants were negative for all anti-EBV antibodies and required repeated serologic tests. The total positive rate of EBV-DNA load was 70.5% and the positive rate of the infants of <1 year old was 61.1%.Five of <1 year old and three of 1 year old seronegative infants with IM symptoms were positive in EBV - DNA load during acute phase were eventually considered as having IM on anti-VCA-IgG seroconversion thereafter. Conclusion It is not sensitive enough to diagnose IM in the infants with serologic test alone. It is proposed that the EBV-DNA load is also evaluated in peripheral blood mononuclear cells when infants presenting with IM symptoms which are negative for anti-EBV antibodies during the acute phase to increase the diagnostic sensitivity of IM in infants.
[Key words] Epstein-Barr virus； Infectious mononucleosis； Epstein-Barr virus antibodies； Epstein-Barr virus DNA
传染性单核细胞增多症（IM）是由EB病毒感染所造成的的急性流行症。临床上以发热、咽峡炎、淋巴结及肝脾肿大、外周血中淋巴细胞添加并呈现异形淋巴细胞等为特征[1]。是儿童时期常见的病毒流行症，一年四季均可发病，临床表现多样，且往往有多脏器危害，前期确诊困难，易漏诊误诊，尤其是在婴幼儿中，因为抗EB病毒抗体反响弱，更给确诊带来困难。本研讨对传染性单核细胞增多症患儿的四种抗EBV抗体及EBV-DNA载量测定进行剖析，以点评此两种检测目标在IM患儿中的确诊含义。
1 材料与办法
1.1 一般材料
选取2010年1月～2012年12月在绍兴市公民医院住院医治的78例确诊为IM的病例，IM确诊规范参阅《诸福棠有用儿科学》[2]，并扫除巨细胞病毒、弓形体、腺病毒及化脓性链球菌感染，其中男46例，女32例，年纪2个月～14岁。按年纪分为四个组：<1岁、1岁、2～3岁、≥4岁。
1.2 办法
静脉抽血2 mL，选用ELISA办法测定EBV四种抗体，包含：VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG和EBNA-IgG。试剂盒由德国OUMEMG公司出产。血清样本来自3个阶段：急性期≤3周，恢复期4～8周，随访期≥24周。并比较各个年纪组的EBV抗体。检测办法参阅试剂说明书。低于1.0×103仿制为阴性。试验一起设阴阳性对照。
1.3 统计学处理
选用SPSS13.0统计学软件对所得数据进行剖析处理，计数材料用χ2查验，P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 VCA-IgM检测成果
各年纪组VCA-IgM成果如表1所示，VCA-IgM在急性期，即发热开端3周内检测。<1岁组、1岁组、2～3岁组和≥4岁组阳性率分别为27.8%、41.2%、61.5%和83.3%，跟着年纪上升，阳性率也在进步。比较VCA-IgM阳性率，<1岁和≥1岁（χ2=8.57，P<0.01），<2岁和≥2岁（χ2=14.25，P<0.01），<4岁和≥4岁（χ2=13.13，P<0.01），差异有统计学含义。病程8周后再检测VCA-IgM，已均为阴性。
2.2 VCA-IgG检测成果
各年纪组VCA-IgG成果如表1所示，VCA-IgG也在IM急性期测得，在IM急性期VCA-IgG总阳性率是92.3%。<1岁组、1岁组VCA-IgG阳性率分别是77.8%和88.2%，>2岁儿童在急性期均能测得VCA-IgG。<1岁组和≥4岁组VCA-IgG阳性率差异具有统计学含义（χ2=7.27，P<0.05）。
2.3 EA-IgG检测成果
各年纪段EA-IgG不一起间段检测成果如表2所示。各年纪组EA-IgG分别在急性期（≤3周），恢复期（4～8周），随访期（≥24周）测得，在急性期，<1岁组、1岁组、2～3岁组和≥4岁组阳性率分别为0、17.6%、30.8%、63.3%。在随访期（≥24周），2岁及以上儿童EA-IgG阳性率约40.0%左右。
2.4 EBNA-IgG检测成果
各年纪段EBNA-IgG不一起间段检测成果如表2所示。EBNA-IgG呈现较晚，约有20%患儿在随访期仍测不到EBNA-IgG。
2.5 EBV-DNA载量检测成果及与VCA-IgM检测成果比较
各年纪段EBV-DNA载量检测成果及与VCA-IgM检测成果比较见表1、3。表1所示EBV-DNA载量阳性率是70.5%。在<1岁患儿中，EBV-DNA载体阳性率分别为61.1%，与同组VCA-IgM的阳性率27.8%比较差异具有统计学含义（χ2=4.05，P<0.05），在2～3岁组及≥4岁组患儿中，EBV-DNA载体阳性率分别为69.2%及80.0%，与同组VCA-IgM阳性率比较对IM前期检出率无显着差异（χ2分别为0.17、0.11，P>0.05）。在<1岁组患儿中有5例，在1岁组患儿中3例前期检测VCA-IgM抗体是阴性，而EBV-DNA载体是阳性的，但在后来的VCA-IgG检测是阳性的。
3 评论
传染性单核细胞增多症（IM）是常见的一种单核巨噬细胞体系急性增生性流行症，首要由EBV感染引起。EBV感染人体后，B淋巴细胞是首要宿主细胞，EB病毒感染B淋巴细胞后，B淋巴细胞可表达一系列EB病毒特异性抗原，诱导机体发生免疫反响，发生针对EBV的多种抗体。在原发性EBV感染过程中首要发生针对衣壳抗原（CA）的IgM和IgG抗体（抗CA-IgM/IgG），抗CA-IgM前期呈现，在1～2个月后消失，抗CA-IgG抗体稍迟于前者。在急性感染晚期，抗前期抗原（EA）抗体呈现，可继续3～6个月，在恢复期晚期抗核抗原（NA）抗体发生，抗CA-IgG和抗NA-IgG可继续终身。抗CA-IgM阳性一直是EB病毒感染IM确诊根据，可是EB病毒感染的血清学反响杂乱多样，有的病例抗CA-IgM发生推迟，有的继续缺失[3～4]，这给IM的前期确诊带来必定困难。现在许多文献仅仅报导CA-IgM在IM确诊中的使用，且阳性率较高，可能与挑选病例的年纪及有典型IM症状及体征才做检测有关。本组病例中，VCA-IgM阳性共45例，阳性率为57.7%，较文献报导低[5，6]，这与本组挑选病例的年纪有关，在咱们挑选的78例IM患儿中，婴幼儿份额较高，<1岁患儿占18/78（23.1%），1岁组占17/78（21.8%）这些患儿的抗CA-IgM、抗CA-IgG抗体阳性率均不高，抗CA-IgM为27.8%、41.2%，抗CA-IgG抗体为77.8%、88.2%，而在≥4岁的儿童中抗CA-IgM阳性率在80%以上，这表明用现在的血清学规范在急性期来确诊>2岁的患儿IM是有用的，而在1岁或1岁以下患儿的IM还缺少相应的规范。关于<1岁的儿童，不能仅凭抗CA-IgM来确诊，在急性期和恢复期双份血清抗CA-IgG抗体滴度4倍以上的升高可能更有用，所以需重复进行血清检测。而对立EA抗体和抗CA-IgM/IgG相同，在<1岁和1岁年纪组中，阳性率均很低，这可能与相对年长儿童、小年纪儿童的抗体反响弱有关。而NA-IgG在恢复期晚期呈现，20%患儿在随访期仍测不到。
EBV-DNA检测一方面能够使用于EBV携带者的低水平仿制，此外还能够检测EBV相关性疾病的活动性感染。对EBV携带者而言，其淋巴细胞内一般可能存在着较低水平的EBV-DNA载量，但这些携带者的血浆及血清中则很少检测到EBV-DNA。实时荧光定量PCR能够精确地检测病毒的仿制数，能更精确地反映EB病毒感染和病毒仿制状况，为IM患儿在临床确诊及医治上供给很大协助。在咱们的研讨中，EBV-DNA载体总阳性率为70.5%，与国内文献适当[7]，在<1岁及1岁组患儿中，EBV-DNA载体阳性率分别为61.1%及64.7%，与同组VCA-IgM阳性率27.8%、41.2%比较差异具有统计学含义（P<0.01），咱们发现在<1岁组患儿5例，在1岁组患儿3例在急性阶段血清学是阴性的，EBV-DNA是阳性的，在后来复查血清学抗CA-IgG转成阳性便作出了清晰确诊。那么在IM急性期，当EBV特异抗体未被检测到，EBV-DNA检测是否能够作为弥补。特别是在婴幼儿中，较弱的和推迟的抗体生成可能是因为他们的免疫反响未成熟[8，9]，所以当婴幼儿有典型的IM症状，而急性期中抗体又是阴性，咱们是否能够经过添加检测EBV-DNA作为弥补来进步确诊敏感性。
[参阅文献]
[1] Olson D， Huntington MK. Co-infection with cytomegalovirus and Epstein-Barr virus in mononucleosis. Case report and review of literature[J]. S D Med，2009，62（9）：349-353.
[2] 吴瑞萍，胡亚美，江载芳. 诸福棠有用儿科学[M]. 第7版.北京：公民卫生出版社，2002：821-827.
[3] Robertson P，Beynon S，Whybin R，et al. Measurement of EBV-IgG anti-VCA avidity aids the early and reliable diagnosis of primary EBV infection[J]. J Med Virol，2003，70（8）：617-623.
[4] Beutel K，Gross -Wieltsch U，Wiesel T，et al. Infection of T lymphocytes in Epstein-Barr virus-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis in children of non-Asian origin[J]. Pediatr Blood Cancer，2009，53（2）：184-190.
[5] 朱易萍，高举，杜惠容，等. 196例传染性单核细胞增多症的并发症和试验室查看[J]. 有用儿科临床杂志，2003， 18（11）：902-903.
[6] 刘春艳，闫静，刘亚谊，等. EB病毒相关性传染性单核细胞增多症的血清学确诊[J]. 中华流行病学杂志，2007，28（9）：898-900.
[7] 严海燕，罗晓红，陈娟，等. EB病毒抗体和DNA联合检测可进步儿童传染性单核细胞增多症的确诊活络度[J].我国微生态学杂志，2011，23（6）：540-542.
[8] 阳惠，刘湘梅. 儿童EB病毒感染传染性单核细胞增多症58例效果调查与护理[J]. 齐鲁护理杂志，2011，17（28）：35-36.
[9] 肖小鹏. 小儿传染性单核细胞增多症的诊治剖析[J]. 临床合理用药杂志，2012，5（33）：84.
（收稿日期：2013-09-23）
[参阅文献]
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（收稿日期：2013-09-23）
