郑琰+张秀美+崔岩
[摘要] 意图 树立高效液相色谱法测定咳喘宁中桔梗皂苷D的办法。 办法 选用以蒸发光散射检测器的高效液相色谱法，色谱柱为Kromasil C18（4.6 mm×250.0 mm，5 μm），活动相为乙腈∶水（28∶72），流速为0.9 ml/min，ELSD漂移管温度为70℃，气体流速为3.0 SLPM/min。 成果 桔梗皂苷D进样量在0.513～10.260 μg规模内呈杰出线性关系（r=0.9996），均匀回收率98.44%，RSD=0.88%（n=6）。 定论 该办法精确，牢靠，重复性好，灵敏度高，可用于咳喘宁的质量操控规范。
[关键词] 咳喘宁；桔梗皂苷D；高效液相色谱法-蒸发光散射检测器
[中图分类号] R286[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）05（b）-0011-03
Determination of platycodin D in Kechuanning by HPLC-ELSD method
ZHENG Yan ZHANG Xiu-li CUI Yan
Institute for Food and Drug Control of Chaoyang City in Liaoning Province,Chaoyang122000,China
[Abstract] Objective To establish a method for determination the content of platycodin D in Kechuanning. Methods High performance liquid chromatography with evaporative light scattering detector(HPLC-ELSD)method was used,the column was Kromasil C18(4.6 mm×250.0 mm,5 μm),mobile phase was acetonitrile︰water(28∶72).The flow rate was 0.9 ml/min,the ELSD drift tube temperature was 70℃ and the gas flow rate was 3.0 SLPM/min. Results The linear range of Platycodin D was 0.513-10.260 μg(r=0.9996).The average recovery was 98.44%,RSD=0.88%(n=6). Conclusion The method is accurate,reliable,good reproducibility,high sensitivity and can be used for the quality control of Kechuanning standard.
[Key words] Kechuanning;Platycodin D;HPLC-ELSD
咳喘宁收载于原卫生部药品规范中药成方制剂第二册[1]，由桔梗、石膏、罂粟壳、甘草、麻黄、百部、苦杏仁等七味药制备而成的复方制剂，具有宣肺通气、止咳平喘之成效，用于支气管哮喘、咳嗽、晚年痰喘。桔梗为处方中的君药，其镇咳祛痰的效果与桔梗含量凹凸密切相关。桔梗含多种皂苷，以桔梗皂苷D为主，在规范中只要此药的性状及惯例查看项，无任何定性及定量辨别，故笔者参阅《我国药典》[2]及其他文献中桔梗的含量测定办法，树立HPLC-ELSD测定咳喘宁中桔梗皂苷D。
1 仪器与试剂
Waters 2695型高效液相色谱仪，Waters 2424型蒸发光散射检测器，CPA225D电子剖析天平（德国赛多利斯公司），9860A型超声仪（费纳米科技发展有限公司）。桔梗皂苷D对照品（我国药品生物制品检定所，批号：111851-201204），咳喘宁（海南先声药业有限公司，批号：20130501、20130804、20131001），乙腈为色谱纯，水为纯净水，三氯甲烷、正丁醇、甲醇等试剂均为剖析纯。
2 办法与成果
2.1 色谱条件
色谱柱Waters C18（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）；活动相：乙腈-水（28∶72）；柱温：28℃；流量：0.9 ml/min；漂移管温度：70℃，气体流速3.0 SLPM/min。理论板数按桔梗皂苷D峰核算≥4000[3-14]。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备精细称取桔梗皂苷D对照品5.13 mg置于10 ml容量瓶中，加甲醇少数溶解并稀释刻度，作为对照品溶液，其浓度为0.513 mg/ml[2]。
2.2.2 供试品溶液的制备精称本品20片，研细，精称13片量，精细参加50%甲醇50 ml，称定分量，超声处理30 min，放冷，再称定分量，用50%甲醇补足减失的分量，摇匀，滤过，精细量取续滤液25 ml，水浴蒸干，残渣加水20 ml，微热使溶解，参加用水饱满的正丁醇30 ml，振摇提取，再别离提取两次，20 ml/次，兼并正丁醇提取液，用氨试液50 ml洗刷，弃去氨液，再用正丁醇饱满水50 ml洗刷，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3 ml使溶解，加硅胶0.5 g拌匀，置水浴上蒸干，加于硅胶柱[100～120目，10 g，内径为2 cm，用三氯甲烷-甲醇（9∶1）（混合溶液①）混合溶液湿法装柱]上，以混合溶液①150 ml洗脱，弃去洗脱液，再用混合溶液②100 ml洗脱，弃去洗脱液，继用混合溶液②[三氯甲烷-甲醇-水（60∶20∶3）]100 ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得供试品溶液[2]。按处方称取不含桔梗的其他药材，制备阴性样品，按2.2.2制备办法制备阴性对照溶液。
2.3 办法学调查
2.3.1 阴性搅扰实验别离精细汲取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，在上述色谱条件下测定，成果见图1。该色谱条件下桔梗皂苷D峰形杰出，阴性对照图谱显现在此处无搅扰，标明其他成分对测定无搅扰。
图1 咳喘宁HPLC色谱图
A.对照品（桔梗皂苷D）；B.供试品；C.阴性对照
2.3.2 线性关系调查别离精细汲取对照品溶液1、5、10、15、20 μl，别离注入液相色谱仪，记载色谱图。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），制作规范曲线，回归方程Y=30205.9X+19474.1（r=0.9996），标明桔梗皂苷D对照品进样量在0.513～10.260 μg规模内有杰出的线性关系。
2.3.3 精细度实验精细汲取对照品溶液10 μl，重复进样6次，按峰面积记载色谱图，RSD=0.34%（n=6），成果提示仪器精细度杰出。
2.3.4 重复性实验取同一批号（批号为20130501）样品6份，依法处理后别离测定，RSD=0.98%，标明该办法重复性杰出。
2.3.5 安稳性实验取同一供试品溶液（批号为2013 0501）10 μl，按上述色谱条件，别离于0、2、4、8、12、24 h测定，以峰面积核算，RSD=0.85%，标明供试品溶液在24 h内根本安稳。
2.3.6 加样回收率实验精细称取己知含量的供试品（批号20130501，桔梗皂苷D含量为0.1223 mg/g）6份，每份3.2 g，精细参加定量的桔梗皂苷D对照品溶液，按供试品溶液办法制备，依法测定含量并核算回收率，成果见表1。
表1 加样回收率实验成果
2.4 样品含量测定
取3批样品，按供试品溶液办法制备，别离进样10 μl，依法测定，选用外标两点法核算样品中桔梗皂苷D的含量，成果见表2。
表2 样品中桔梗皂苷D的测定成果（n=5）
3 评论
3.1 关于桔梗皂苷D
现代研讨标明，桔梗中所含化学成分首要为五环三萜类的多糖苷，包含桔梗皂苷A、C、D、D2、D3，而桔梗皂苷D是桔梗皂苷中的首要皂苷。药效学实验标明，桔梗皂苷D具有明显镇咳、祛痰效果，与桔梗主治成效相符[15-16]。
3.2 紫外法剖析
桔梗的活性成分桔梗皂苷D只要1个C=C双键，在紫外处简直无吸收，所以本文选用HPLC-ELSD法对其进行定量剖析。
3.3 活动相的挑选
参阅《我国药典》2010年版中桔梗皂苷D的色谱条件，别离调查了乙腈-水，甲醇-水体系，成果发现乙腈-水体系有较好的色谱峰形及别离度，终究选定了乙腈-水（28∶72）这个份额。
3.4 检测器条件的研讨
研讨发现，载气流速和漂移管的温度对ELSD的检测性有较大影响。ELSD漂移管温度设为50℃时，色谱峰峰形不对称且基线噪声偏大，将温度调高至70℃时，有了较好的色谱峰形且基线噪声变小，故终究选定漂移管温度为70℃，气体流速为3.0 SLPM/min。
[参阅文献]
[1]卫生部.中华人民共和国卫生部药品规范中药成方制剂第二册[M].北京：我国医药科技出版社，1986：163.
[2]国家药典委员会.我国药典[M].北京：我国医药科技出版社，2010：259.
[3]李红燕，张蕊，冯晓川.HPLC-ELSD法测定复方枇杷止咳颗粒中桔梗皂苷D、熊果酸、齐墩果酸和贝母素甲[J].中成药，2013，35（7）：1479-1486.
[4]彭善贵，文永盛.高效液相色谱法-蒸发光散射检测器法测定甘桔冰梅片中桔梗皂苷D含量[J].我国药业，2012， 21（19）：28-29.
[5]丁大勇，高菲，姚琳，等.HPLC-ELSD法测定桑菊伤风片的含量中桔梗皂苷D[J].我国中医药信息杂志，2012，19（3）：54-55.
[6]笔雪艳，刘晓风，张清波，等.桔梗药材及饮片的质量规范研讨[J].中医药信息，2011，28（6）：69-71.
[7]姚琳，孙妍，谭思思，等.瓜桔止嗽丸薄层辨别及桔梗皂苷D的含量测定[J].中华中医药学刊，2013，31（7）：1703-1705.
[8]张晶，李伟，王梓，等.RP-HPLC法测定桔梗地上部分桔梗皂苷D的含量[J].药物剖析杂志，2008，28（9）：1497-1499.
[9]李伟，王梓，刘志，等.RP-HPLC一起测定桔梗中去芹糖桔梗皂苷D与桔梗皂苷D[J].中草药，2009，40（11），1823-1825.
[10]龙芳.RP-HPLC-ELSD法测定贝杏止咳膏中桔梗皂苷D的含量.[J].中医药导报，2011，17（10）：68-70.
[11]夏泉，董婷霞，詹华强，等.HPLC-ELSD法测定不同来历桔梗中桔梗皂苷E的含量[J].药物剖析杂志，2006， 26（5）：637-639.
[12]叶静，肖美添，汤须崇，等.HPLC-ELSD法测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量[J].西安交通大学学报·医学版，2010，31（5）：640-642.
[13]杨壮.桔梗总皂苷的提取和纯化工艺研讨[D].杭州：浙江大学药学院，2007.
[14]朱丹妮，舒娈，郅慧，等.HPLC-ELSD法测定桔梗阻中桔梗皂苷D的含量[J].植物资源与环境学报，2001，10（4）：11-13.
[15]南京中医药大学.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，2006：1552-1555.
[16]肖培根.新编中药志[M].北京：化学工业出版社，2007：797-802.
（收稿日期：2014-03-25本文修改：李亚聪）
2.3.6 加样回收率实验精细称取己知含量的供试品（批号20130501，桔梗皂苷D含量为0.1223 mg/g）6份，每份3.2 g，精细参加定量的桔梗皂苷D对照品溶液，按供试品溶液办法制备，依法测定含量并核算回收率，成果见表1。
表1 加样回收率实验成果
2.4 样品含量测定
取3批样品，按供试品溶液办法制备，别离进样10 μl，依法测定，选用外标两点法核算样品中桔梗皂苷D的含量，成果见表2。
表2 样品中桔梗皂苷D的测定成果（n=5）
3 评论
3.1 关于桔梗皂苷D
现代研讨标明，桔梗中所含化学成分首要为五环三萜类的多糖苷，包含桔梗皂苷A、C、D、D2、D3，而桔梗皂苷D是桔梗皂苷中的首要皂苷。药效学实验标明，桔梗皂苷D具有明显镇咳、祛痰效果，与桔梗主治成效相符[15-16]。
3.2 紫外法剖析
桔梗的活性成分桔梗皂苷D只要1个C=C双键，在紫外处简直无吸收，所以本文选用HPLC-ELSD法对其进行定量剖析。
3.3 活动相的挑选
参阅《我国药典》2010年版中桔梗皂苷D的色谱条件，别离调查了乙腈-水，甲醇-水体系，成果发现乙腈-水体系有较好的色谱峰形及别离度，终究选定了乙腈-水（28∶72）这个份额。
3.4 检测器条件的研讨
研讨发现，载气流速和漂移管的温度对ELSD的检测性有较大影响。ELSD漂移管温度设为50℃时，色谱峰峰形不对称且基线噪声偏大，将温度调高至70℃时，有了较好的色谱峰形且基线噪声变小，故终究选定漂移管温度为70℃，气体流速为3.0 SLPM/min。
[参阅文献]
[1]卫生部.中华人民共和国卫生部药品规范中药成方制剂第二册[M].北京：我国医药科技出版社，1986：163.
[2]国家药典委员会.我国药典[M].北京：我国医药科技出版社，2010：259.
[3]李红燕，张蕊，冯晓川.HPLC-ELSD法测定复方枇杷止咳颗粒中桔梗皂苷D、熊果酸、齐墩果酸和贝母素甲[J].中成药，2013，35（7）：1479-1486.
[4]彭善贵，文永盛.高效液相色谱法-蒸发光散射检测器法测定甘桔冰梅片中桔梗皂苷D含量[J].我国药业，2012， 21（19）：28-29.
[5]丁大勇，高菲，姚琳，等.HPLC-ELSD法测定桑菊伤风片的含量中桔梗皂苷D[J].我国中医药信息杂志，2012，19（3）：54-55.
[6]笔雪艳，刘晓风，张清波，等.桔梗药材及饮片的质量规范研讨[J].中医药信息，2011，28（6）：69-71.
[7]姚琳，孙妍，谭思思，等.瓜桔止嗽丸薄层辨别及桔梗皂苷D的含量测定[J].中华中医药学刊，2013，31（7）：1703-1705.
[8]张晶，李伟，王梓，等.RP-HPLC法测定桔梗地上部分桔梗皂苷D的含量[J].药物剖析杂志，2008，28（9）：1497-1499.
[9]李伟，王梓，刘志，等.RP-HPLC一起测定桔梗中去芹糖桔梗皂苷D与桔梗皂苷D[J].中草药，2009，40（11），1823-1825.
[10]龙芳.RP-HPLC-ELSD法测定贝杏止咳膏中桔梗皂苷D的含量.[J].中医药导报，2011，17（10）：68-70.
[11]夏泉，董婷霞，詹华强，等.HPLC-ELSD法测定不同来历桔梗中桔梗皂苷E的含量[J].药物剖析杂志，2006， 26（5）：637-639.
[12]叶静，肖美添，汤须崇，等.HPLC-ELSD法测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量[J].西安交通大学学报·医学版，2010，31（5）：640-642.
[13]杨壮.桔梗总皂苷的提取和纯化工艺研讨[D].杭州：浙江大学药学院，2007.
[14]朱丹妮，舒娈，郅慧，等.HPLC-ELSD法测定桔梗阻中桔梗皂苷D的含量[J].植物资源与环境学报，2001，10（4）：11-13.
[15]南京中医药大学.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，2006：1552-1555.
[16]肖培根.新编中药志[M].北京：化学工业出版社，2007：797-802.
（收稿日期：2014-03-25本文修改：李亚聪）
2.3.6 加样回收率实验精细称取己知含量的供试品（批号20130501，桔梗皂苷D含量为0.1223 mg/g）6份，每份3.2 g，精细参加定量的桔梗皂苷D对照品溶液，按供试品溶液办法制备，依法测定含量并核算回收率，成果见表1。
表1 加样回收率实验成果
2.4 样品含量测定
取3批样品，按供试品溶液办法制备，别离进样10 μl，依法测定，选用外标两点法核算样品中桔梗皂苷D的含量，成果见表2。
表2 样品中桔梗皂苷D的测定成果（n=5）
3 评论
3.1 关于桔梗皂苷D
现代研讨标明，桔梗中所含化学成分首要为五环三萜类的多糖苷，包含桔梗皂苷A、C、D、D2、D3，而桔梗皂苷D是桔梗皂苷中的首要皂苷。药效学实验标明，桔梗皂苷D具有明显镇咳、祛痰效果，与桔梗主治成效相符[15-16]。
3.2 紫外法剖析
桔梗的活性成分桔梗皂苷D只要1个C=C双键，在紫外处简直无吸收，所以本文选用HPLC-ELSD法对其进行定量剖析。
3.3 活动相的挑选
参阅《我国药典》2010年版中桔梗皂苷D的色谱条件，别离调查了乙腈-水，甲醇-水体系，成果发现乙腈-水体系有较好的色谱峰形及别离度，终究选定了乙腈-水（28∶72）这个份额。
3.4 检测器条件的研讨
研讨发现，载气流速和漂移管的温度对ELSD的检测性有较大影响。ELSD漂移管温度设为50℃时，色谱峰峰形不对称且基线噪声偏大，将温度调高至70℃时，有了较好的色谱峰形且基线噪声变小，故终究选定漂移管温度为70℃，气体流速为3.0 SLPM/min。
[参阅文献]
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[2]国家药典委员会.我国药典[M].北京：我国医药科技出版社，2010：259.
[3]李红燕，张蕊，冯晓川.HPLC-ELSD法测定复方枇杷止咳颗粒中桔梗皂苷D、熊果酸、齐墩果酸和贝母素甲[J].中成药，2013，35（7）：1479-1486.
[4]彭善贵，文永盛.高效液相色谱法-蒸发光散射检测器法测定甘桔冰梅片中桔梗皂苷D含量[J].我国药业，2012， 21（19）：28-29.
[5]丁大勇，高菲，姚琳，等.HPLC-ELSD法测定桑菊伤风片的含量中桔梗皂苷D[J].我国中医药信息杂志，2012，19（3）：54-55.
[6]笔雪艳，刘晓风，张清波，等.桔梗药材及饮片的质量规范研讨[J].中医药信息，2011，28（6）：69-71.
[7]姚琳，孙妍，谭思思，等.瓜桔止嗽丸薄层辨别及桔梗皂苷D的含量测定[J].中华中医药学刊，2013，31（7）：1703-1705.
[8]张晶，李伟，王梓，等.RP-HPLC法测定桔梗地上部分桔梗皂苷D的含量[J].药物剖析杂志，2008，28（9）：1497-1499.
[9]李伟，王梓，刘志，等.RP-HPLC一起测定桔梗中去芹糖桔梗皂苷D与桔梗皂苷D[J].中草药，2009，40（11），1823-1825.
[10]龙芳.RP-HPLC-ELSD法测定贝杏止咳膏中桔梗皂苷D的含量.[J].中医药导报，2011，17（10）：68-70.
[11]夏泉，董婷霞，詹华强，等.HPLC-ELSD法测定不同来历桔梗中桔梗皂苷E的含量[J].药物剖析杂志，2006， 26（5）：637-639.
[12]叶静，肖美添，汤须崇，等.HPLC-ELSD法测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量[J].西安交通大学学报·医学版，2010，31（5）：640-642.
[13]杨壮.桔梗总皂苷的提取和纯化工艺研讨[D].杭州：浙江大学药学院，2007.
[14]朱丹妮，舒娈，郅慧，等.HPLC-ELSD法测定桔梗阻中桔梗皂苷D的含量[J].植物资源与环境学报，2001，10（4）：11-13.
[15]南京中医药大学.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，2006：1552-1555.
[16]肖培根.新编中药志[M].北京：化学工业出版社，2007：797-802.
（收稿日期：2014-03-25本文修改：李亚聪）
