甲庆栓微生物限度检查的方法学验证.pdf
章阳 黄杰
【中图分类号】R951 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2017）11-0-02
1 前言
甲庆栓微生物限度检查条件的不断变化，对其方法学验证提出了新的要求。因此有必要对其相关课题展开深入研究与探讨，以期用以指导相关工作的开展与实践，并取得理想效果。基于此，本文从概述相关内容着手本课题的研究。
2 概述
某些药品本身具有抗菌活性，能够抑制成药中微生物的生长，如果按常规法检验得到的结果不可信，必须采用适当的方法消除或减弱药物的抑菌活性，使微生物正常生长。要判断检验方法的正确性和可行性，必须进行方法验证，确定药品是否具有抑菌性以便确定检验方法。甲庆栓是中国医科大学附属盛京医院生产的院内制剂，系由甲硝唑和庆大霉素组成的常用药，用于预防和治疗腹部切口感染，对肛周炎、附件炎及牙周炎有良好的治疗作用。我们对甲庆栓的微生物限度检查按文献[1]的规定进行了方法学的验证，确立了准确可行的微生物限度检查方法。
3 仪器与试验材料
3.1 恒温水浴锅、恒温培养箱、冰箱、涡旋混合器、甲庆栓（20061207、20070120）
3.2 验证菌株金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26003]、枯草芽孢桿菌（Bacillussubtillis）[CMCC（B）63501]、白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC （F）98001]、黑曲菌（Aspergillusniger）[CMCC（F）98003][2]。
3.3 阴性对照菌株：大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44102]。
4 细菌、霉菌及酵母菌计效方法的验证
菌种：验证菌种所用的菌株传代次数不得超过5 代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，保证试验菌株的生物学特性[3]。
4.1 供试液的制备取供试品5g（含聚山梨醇80），加45℃pH为7.0的无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液至100ml，制成供试液。
4.2 菌液的制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养18～24h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养24～48h。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数为50～100 cfu 的菌悬液。接种黑曲菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5～7 天，加入3～5 ml 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸孢子悬液至无菌试管中，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1 ml 含孢子数为50～100 cfu 的孢子悬液。
4.3 验证方法进行3 次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。试验组1：2000 的供试液检出试验菌，故按此浓度制备供试品，按菌落计数方法测定供试品的本底菌数。稀释剂对照组采用0.9% 无菌氯化钠溶液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml 供试液含50～100 cfu，按试验组以供试液制备方法示菌落计数方法测定其菌数。
5 试验结果
回收率计算：回收率应不低于70%。回收率=[（试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数）÷菌液组平均菌落数]×100%。
通过验证数据，应用本法对甲庆栓进行细菌、霉菌和酵母菌的菌落计数，试验组及稀释剂对照组的菌数回收率均大于70%，符合制剂质量控制要求。
6 讨论
6.1 对甲庆栓的微生物限度检查原采用供试品1：20作为最低稀释级样品，由于该样品含有抑菌性药物，通过方法验证改为1：2000。
6.2 试验中菌液经稀释至适宜浓度后，应放入冰箱保存，每次使用前35～45℃水浴活化30min，确保细菌活性及菌数稳定。
7 结束语
通过对甲庆栓微生物限度检查方法学验证的研究，我们可以发现，该项工作良好实践效果的取得，有赖于对其多项影响因素与关键环节的充分掌控，有关人员应该从其客观实际情况出发，研究制定最为符合实际的应对实施措施。
参考文献
国家药典委员会编.中国药典〔S〕.2005（二部）.附录ⅪA.
童爱武.四种抑菌性制剂微生物限度检查探讨[J].辽宁药物与临床，2004，7（2）：93-94.
马绪荣，苏德模.药品微生物学检验手册[M].北京：科学出版社， 2000： 58endprint
