姚志勇+李新宇+支钦
[摘要] 意图 改进醋酸阿托西班打针液处方并优化生产工艺，以增加醋酸阿托西班打针液的安稳性。 办法 以市售处方工艺为根底，在其平别离参加不同品种的抗氧剂，得到醋酸阿托西班打针液样品，将打针液样品别离置于以下条件下：温度（40±2）℃、相对湿度（75±5）%和温度（25±2）℃、相对湿度（60±5）%，进行加快试验，别离在0、1、2、3、6个月取样查验，经过丈量外观色泽、pH值、溶液弄清度、有关物质、含量等目标和部分安全性调查，然后优选出安稳性较市售产品更好、运用安全的醋酸阿托西班打针液。 成果 经加快试验调查6个月，抗氧剂为0.1 g/100 ml亚硫酸氢钠时，制备的醋酸阿托西班打针液与已上市的醋酸阿托西班打针液比较，外观色泽、酸度、溶液弄清度目标适当，有关物质与含量显着优于已上市产品，可于室温下保存，安稳性显着增加。经过部分安全性试验标明此打针剂无影响性、致敏性和溶解性。 定论 该打针剂处方合理，制备工艺可行，产品安全，安稳性高。
[关键词] 醋酸阿托西班打针液；抗氧剂；制备工艺；安稳性；安全性
[中图分类号] R965.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）10（a）-0004-04
醋酸阿托西班是一种催产素类似物，为人工合成的环状多肽，是子宫内蜕膜、胎膜上受体的催产素竞争性拮抗剂，在临床上被用于医治早产。醋酸阿托西班可剂量相关性地按捺宫缩，并使环状肽催产素介导的前列腺素排泄削减，到达保胎的意图[1]。有研讨报导，对13例早产妇女（28～36周孕龄）运用阿托西班医治，以10～100 μg/min的速率输注1～10 h，在宫缩描记图上调查到有6例早产妇女子宫缩短显着削减，阿托西班对母亲或胎儿的心率以及母亲的血压无不良反响[2]。另一报导对12例早产妇女（27～36周孕龄）运用阿托西班医治，以25～100 μg/min的速率输注1.5～13.0 h，有6例患者取得了彻底安胎，阿托西班对母亲和胎儿无不良反响[3]。
已上市的醋酸阿托西班打针液只可于2～8℃保存，针对该问题，本研讨参加抗氧剂以进步制剂的安稳性，可在室温下保存。因而，本研讨对醋酸阿托西班打针液的处方及制备工艺进行了挑选，对其安稳性进行了研讨与点评，别的对优化后的处方进行了动物部分安全性点评试验。
1 仪器与试药
Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦）；BT 125D型十万分之一天平（上海精细科学仪器有限公司）；X0001SDP药品安稳性试验箱（上海锡为科学仪器有限公司）。
醋酸阿托西班打针液（辉凌药业，批号：AC0089G，标准：7.5 mg/ml∶5 ml），亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠均为剖析纯；醋酸阿托西班（克己）。
新西兰兔，一般级，男女参半，体重2.0～2.5 kg（广东省医学试验动物中心）；SD大鼠，一般级，男女参半，体重180～220 g（广东省医学试验动物中心）。
2 办法与成果
2.1 醋酸阿托西班打针液的制备工艺初定
已上市的醋酸阿托西班打针液（生产厂家：Ferring Gmbh）的处方包含有7.5 mg/ml醋酸阿托西班，50 mg/ml甘露醇，用1 mol/L盐酸调至pH 4.5，需于2～8℃保存，本研讨针对该问题参加抗氧剂以进步制剂的安稳性，使其质量更安稳，可在室温下保存。经过屡次试验优化，初定的制备工艺：称量市售制剂处方量的阿托西班、甘露醇、0.1 g/100 ml抗氧剂，用处方量80%打针用水室温下拌和至彻底溶解，用盐酸调pH至4.5，加打针用水定容至全量，拌和均匀。打针液中参加0.05%活性炭，拌和下吸附热原30 min，脱炭过滤。滤液经1 μm钛棒过滤器过滤，再经0.22 μm微孔滤膜除菌过滤，灌装于7 ml灭菌西林瓶内（5 ml/瓶），无菌条件下压塞扎盖。
2.2 醋酸阿托西班打针液的处方挑选
2.2.1 抗氧剂的挑选
为挑选适宜的抗氧剂品种及浓度，进行了进一步的评论研讨，经过屡次剖析验证[4-5]，抗氧剂选自0.1 g/100 ml亚硫酸氢钠、0.1 g/100 ml焦亚硫酸钠。
在已上市的醋酸阿托西班打针液中于无菌室别离参加不同品种的抗氧剂，得到醋酸阿托西班打针液样品。
参照相关文献[6]进行加快试验，条件：①温度（40±2）℃、相对湿度（75±5）%；②温度（25±2）℃、相对湿度（60±5）%。别离在0、1、2、3、6个月取样查验，经过丈量外观色泽、pH值、溶液弄清度、有关物质、含量目标来调查已上市醋酸阿托西班打针液和克己的醋酸阿托西班打针液样品的安稳性，成果见图1、图2。
2.2.2 含量测定办法[7-9]
活动相A：25 mmol/L的磷酸二氢钾，用30%三氟乙酸溶液调pH值至3.5；活动相B：乙腈∶甲醇=50∶50；梯度洗脱程序：B在15 min内由40变至60；色谱柱：C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；波长220 nm，流速1.0 ml/min，柱温：室温；样品制造：加打针用水制造成0.75 mg/ml的溶液；含量：每毫升含阿托西班应为6.8～8.0 mg。
2.2.3 有关物质测定办法[10]
用STPAK C18-ES色谱柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）或适当柱；以磷酸二氢钾溶液（25 mmol/L磷酸二氢钾溶液，用30%三氟乙酸溶液调pH值至3.5）作为活动相A；以乙腈∶甲醇（60∶40）作为活动相B；检测波长为220 nm；流速为1.0 ml/min；柱温为室温；按表1进行梯度洗脱。理论塔板数按阿托西班峰核算应>5000，阿托西班峰与相邻杂质峰的别离度应符合要求，阿托西班峰的拖尾因子应<2。
测定办法：取本品适量，加水稀释制成每毫升中含阿托西班0.75 mg的溶液作为供试品溶液；精细量取供试品溶液1 ml置于100 ml容量瓶中，加水定量稀释至刻度作为对照品溶液。别离精细量取上述两种溶液20 μl注入液相色谱仪，记载色谱图。按面积归一化法核算，阿托西班有关物质单杂不得>0.5%，其他杂质总量不得>1.5%。
成果标明，经加快试验调查6个月，抗氧剂为0.1 g/100 ml亚硫酸氢钠时，制备的醋酸阿托西班打针液与已上市的醋酸阿托西班打针液比较，外观色泽、酸度、溶液弄清度目标适当，有关物质与含量显着好于已上市产品，可于室温下保存，安稳性显着增加。抗氧剂为0.1 g/100 ml焦亚硫酸钠，与已上市的醋酸阿托西班打针液比较，外观色泽、酸度、溶液弄清度、有关物质、含量与已上市的供试品比较，安稳性没有得到改进。
因而，终究抗氧剂挑选0.1 g/100 ml亚硫酸氢钠，依照“2.1”项制备工艺制得醋酸阿托西班打针液，进行以下试验。
2.3 醋酸阿托西班打针液的部分安全性调查
进行部分给药毒性试验，包含肌内打针影响性试验、过敏性试验及溶血性试验[11-13]。
2.3.1 肌内打针部分影响反响试验
2.3.1.1 办法 取新西兰兔6只，体重2.0～2.5 kg，别离于新西兰兔左边股四头肌处打针本品1 ml，右侧打针同体积生理盐水。于末次给药48 h后取4只动物，用20%乌拉坦，剂量为5 ml/kg静脉麻醉，解剖股四头肌，纵向切开，调查打针部位肌肉的影响反响，余下2只动物于末次给药后14 d再按上述办法进些解剖调查。
2.3.1.2 成果 依据影响反响症状和评分标准，新西兰兔肌内打针醋酸阿托西班48 h后，给药部位仅有轻度充血（直径<0.5 cm），无显着影响反响，其均匀影响反响分值均<2.0，停药后14 d，给药部位亦无显着影响反响，标明本研讨制备的醋酸阿托西班打针液样品无影响性。
病理切片成果：给药及停药后，受试给药组与对照组镜下见细胞完好，横纹明晰，未见细胞呈现变性或坏死改变，间质未见水肿及炎症细胞滋润，标明本研讨制备的醋酸阿托西班打针液样品肌内打针无影响性。
2.3.2 全身被迫过敏试验
2.3.2.1 办法 ①致敏：选取健康SD大鼠16只，体重180～220 g，随机分红受试药（批号：110301，标准：7.5 mg/ml∶5 ml，南京星银药业集团有限公司）低剂量组（6.6 mg/ml，0.5 ml/只）、受试药高剂量组（13.2 mg/ml，0.5 ml/只）、生理盐水阴性对照组和卵蛋白（Sigma产品，临用前生理盐水制造成10 mg/ml混悬液备用）阳性对照组（10 mg/ml，0.5 ml/只），每组4只。每组每只大鼠隔日腹腔打针彻底氟式佐剂（标准：10 ml/瓶，批号：90007-81-2，Sigma化学试剂有限公司）（0.5 ml/只）及相应的药液一次，共打针5次。②抗血清制备：致敏末次打针后第10天眼眶取血，离心10 min，3000 r/min，别离血清，-20℃保存，2周内备用。③调查目标：被迫致敏48 h后进行抗原进犯，各组静脉打针与致敏剂量相同的激起抗原加等量的0.5%伊文思染料进行激起30 min后，将动物处死，剪取背部皮肤，丈量皮肤内层的蓝色斑驳巨细，直径>5 mm者判定为阳性。
2.3.2.2 成果 阴性对照组、高剂量组、低剂量组均未见蓝斑，阳性对照卵蛋白组蓝斑直径>5 mm，标明本研讨制备的醋酸阿托西班打针液样品不会引起大鼠被迫皮肤过敏。
2.3.3 溶血性试验
制备2%新西兰兔红细胞悬液。取试管7支，按表2参加各种液体。将各试管悄悄摇匀，置37℃恒温水浴中孵育，调查0.5、1、2、3、6 h的成果。
成果显现，蒸馏水对看管在0.5 h彻底溶血。生理盐水和各醋酸阿托西班打针液在6 h内均无溶血现象。悄悄振摇，生理盐水和各浓度醋酸阿托西班打针液管底堆积的红细胞均能彻底涣散，标明本研讨制备的醋酸阿托西班打针液样品无红细胞凝集反响。
肌肉影响性、过敏性及体外溶血性试验标明，本研讨制备的醋酸阿托西班打针液样品无显着的影响性、过敏性，也不会引起溶血反响，标明本研讨制备的醋酸阿托西班打针液样品安全性好，可供临床静脉打针与肌内打针使用。
3 评论
醋酸阿托西班打针液是由Ferring GmbH研发的一种由9个氨基酸组成的二硫键型的环肽多肽，是一种抗早产药，为欧洲医药学会引荐的一线用药，其是一种催产素的竞争性按捺剂，经过结合在子宫肌层和蜕膜的催产素受体上，阻挠催产素在靶细胞上发挥作用，然后到达防备早产的意图[14-16]。
打针剂中常用的抗氧剂包含焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、硫脲和抗坏血酸等，其间亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠的水溶液pH在4.0～5.5，适合在酸性溶液中使用。因为本打针剂为酸性打针剂，其pH为4.5，因而挑选此两种抗氧剂来进行处方优化。
本研讨在醋酸阿托西班打针液原处方的根底上，增加抗氧剂，以外观、pH值、溶液弄清度、有关物质、含量为目标，进行加快安稳性调查，成果显现，增加0.1%亚硫酸氢钠可显着进步醋酸阿托西班打针液的安稳性，一起改进原制剂的贮存条件，使之可在室温下保存，便利运送和贮存。依照优化后处方和生产工艺制备的产品质量安稳，部分用药安全，可确定为最优处方和生产工艺。
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（收稿日期：2014-08-15 本文修改：林利利）
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（收稿日期：2014-08-15 本文修改：林利利）
