陈彦明 戴凤燕
[摘要] 意图 评论流式细胞术检测细小残留病（MRD）在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）医治中的临床价值。 办法 用多种四色荧光抗体组合检测50例正常儿童骨髓，据此树立双参数点图剖析模型，500例ALL初发患儿行流式细胞剖析，选出异于正常骨髓细胞免疫表型组合来检测MRD，依据确定好的免疫表型组合对105例患儿诱导医治完毕及后续医治中的骨髓标本行MRD监测，同步行细胞形状学检测和PCR检测。 成果 流式细胞术检出462例有用MRD免疫表型组合，PCR检出142例判别MRD的交融基因或IgH/T淋巴细胞受体基因重排；细胞形状学对诱导医治后的患儿的MRD阳性检出率为66.67%，流式细胞术的MRD阳性检出率为91.43%。 定论 流式细胞术能对ALL患儿医治期间的MRD作出精确评价，具有较好的掩盖面和敏感性，值得临床使用。
[关键词] 急性淋巴细胞白血病；细小残留病；流式细胞术
[中图分类号] R733.7 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2014）02（a）-0171-03
急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leuke- mia，ALL）严重影响患儿健康发育，3～4岁是其高发年纪，发热、贫血、肝脾肿大等是其前期症状。临床报导指出个体化医治对ALL患者尤为重要[1]，医治强度应当同其复发危险相适应。细小残留病（minimal residual disease，MRD）是经过诱导化疗或骨髓移植医治后体内仍残留的白血病细胞形状，它是诱发白血病复发的本源，逐步被归入辅导个体化医治的关键性目标[2]。现在聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）和流式细胞术是MRD两种查看办法，本研讨评论剖析流式细胞术检测MRD在儿童ALL医治中的临床价值，现报导如下。
1 材料与办法
1.1 一般材料
随机选取2009年1月～2012年12月于本院承受诱导缓解医治的500例ALL患儿，男性296例，女人204例，年纪1～8岁，均匀（4.2±1.2）岁，上述病例经细胞形状学、免疫学、遗传学和分子生物学等办法确诊，B淋巴细胞白血病465例，T淋巴细胞白血病35例。同期行健康查看的正常儿童50例，男性28例，女人22例，年纪1～10岁，均匀（4.5±1.5）岁。
1.2 仪器和试剂
首要仪器：O-Rid Cycler定量PCR仪（美国Bio-Rid公司），FACSCalibur 型流式细胞仪（美国BD公司）；D10-藻红蛋白（PE）、CD22-TC、CD13-异硫氰酸荧光素（FITC）、CD38-FITC、CD33-FITC、CD66c（KOR-SA3544）-FITC、CD58-FITC、透膜剂IntraPrep（法国Immunotech公司）；CD45-FITC、CD19-APC、CD33-APC、CD5-PE、CD34-PerCP、HLA-DR-APC、CD3-PerCP、溶血剂FACSLysing（美国Becton Dickin-son公司）；TdT-FITC（美国Supertechs公司）。
1.3 检测办法
收集50例正常儿童的骨髓细胞，经过流式细胞术运用多种四色荧光抗体组合进行检测，树立其双参数点图剖析模型，所得成果同文献[3-4]相符。依据正常儿童的双参数点图剖析模型对500例ALL初发患儿行流式细胞剖析，比较两者的免疫表型组合的差异，选出异于正常骨髓细胞免疫表型组合来检测MRD，对数据进行存档。从中选取诱导医治完毕及后续医治的患儿的骨髓标本（105例）行流式细胞术，调用从前存档比较相同病例的数据，双参数点图原白血病细胞方位仍呈现细胞则可断定白血病残留细胞，残留细胞占骨髓有核细胞总数份额记为MRD检测值。500例患儿同时行细胞形状学查看和PCR查看，依照仪器操作阐明进行，将成果同流式细胞术的检测成果进行比照剖析。
1.4 统计学办法
选用SPSS 13.0统计学软件进行数据剖析，计量材料选用t查验，计数材料选用χ2查验，以P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
流式细胞术检出462例有用MRD免疫表型组合，PCR检出142例判别MRD的交融基因或IgH/T淋巴细胞受体基因重排，两者比较差异有统计学含义（P<0.01）；细胞形状学对诱导医治后的患儿的MRD阳性检出率为66.67%，35例未检测出MRD，流式细胞术的MRD阳性检出率为91.43%，两者比较，差异有统计学含义（χ2=19.43，P<0.01）。
3 评论
MRD对儿童ALL的临床作用和预后断定有重要价值[5]，以往检测MRD的办法包含形状学查看、染色体核型剖析、荧光原位杂交技能、异倍体细胞技能等，但上述办法的有用掩盖规模和敏感性均较差，不适于作为MRD的检测手法[6]。跟着科技的开展，流式细胞术和PCR逐步使用于该病灶的检测[7]。成年急性非淋巴细胞白血病的MRD检测中，交融基因掩盖面较广，体内存在也较安稳，因而PCR对其检测作用较好[8]，但儿童ALL的交融基因缺少特异性，单基因的掩盖面相对较小，因而其在儿童ALL中的使用价值存在必定的局限性[9]。本次检测成果显现500例患儿PCR后仅142例检测出MRD，流式细胞术462例检测出MRD，显着多于PCR，此成果阐明流式细胞术具有较广的掩盖面。本研讨树立了科学的检测办法，经过反常免疫表型特征与正常细胞间的区别来检测MRD，白血病细胞的某些抗原表达质和量均存在较大的差异，经过抗原表达同正常细胞间的差异就可以对MRD进行区别[10]，联合多种抗原检测更增强了两者间的差异性。本文经过对105例患儿诱导医治完毕及后续医治中的骨髓标本行MRD监测，进一步证明形状学查看对MRD的敏感性远低于流式细胞术，和相关报导根本相符[11]。白血病医治过程中部分患者会发作抗原表达改动，因而采纳多个免疫表型组合来查看MRD可以较好地防止假阳性[12]。别的需求加强标本的处理，对细胞数、抗体量、孵育时刻及离心速度等做到标准化，下降其对检测成果的影响，进步检出作用[13]。
综上所述，流式细胞术能对ALL患儿医治期间的MRD作出精确评价，具有较好的掩盖面和敏感性，值得临床使用。
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（收稿日期：2013-12-02 本文修改：魏玉坡）
