杨争秒+程万宏+王艳俊
摘要：目的 抑制A2细胞中Wnt-1基因表达，探讨Wnt-1基因在A2细胞中的作用。方法 siRNA转染A2细胞，RT-PCR和Western blotting测定Wnt-1基因表达的变化。结果 转染siRNA后，实验组（Wnt-1组）对应靶基因mRNA表达和蛋白表达均有明显降低。结论 Wnt-1特异性siRNA能有效干扰A2细胞内其相应基因的表达，使细胞增殖能力下降。
关键词：人肺腺癌细胞株A2 Wnt-1 siRNA
siRNA inhibition Wnt-1 gene and its effect in human lung adenocarcinoma cell line A2
Yang Zhengmiao Cheng Wanhong Wang Yanjun
（Xinhua Hospital Affiliated to Dalian University LiaoNing Da Lian 116011）
Abstract：Objective To inhibitate the expresion of Wnt-1，so as to asses the role of Wnt-1 in A2 cells.Methods SiRNA was transfected into A2. The changes of expression of Wnt-1 were assayed by RT-PCR and Westen blotting. Results The expression of mRNA and protein of Wnt-1 in A2 cells was obviously decreased and the growth was significantly inhibited in transfected cells. Conclusion Interference with siRNA against Wnt-1 can effectively inhibit the specific gene expression and the proliferation of the A2 cells.
Key words：Human lung adenocarcinoma cell line A2 Wnt-1 siRNA
癌基因Wnt-1在异常激活或发生突变后，与多种肿瘤的发生发展有关。为此，我们采用siRNA转染的方法，抑制人肺腺癌细胞株A2中Wnt-1基因的表达，以探讨其对细胞生长和凋亡的影响。
1.材料与方法
1.1材料 人肺腺癌细胞株A2为中国医科大学肿瘤研究所保存。
1.2 RT-PCR和Western Blotting检测转染细胞Wnt-1基因表达 cDNA反转录反应条件：30℃ 10min，42℃ 30min，99℃ 5min， 5℃ 5min。PCR反应条件：94℃预变性2min，94℃40s，57℃40s，72℃1min，30个循环后，72℃延伸10min。
1.3光镜观察细胞形态 转染48h后，分别取各实验组光镜下观察细胞的形态变化。
2.结果
2.1 siRNA转染后Wnt-1和nm23-H1基因mRNA及其蛋白表达的变化 转染后，实验组对应靶基因表达受到抑制，条带明显减弱。
2.2 siRNA转染后对人肺腺癌细胞株A2生物学特性的影响 转染48h后，实验组出现细胞形态缩小，体积大小不一，形态不一，一部分胞体呈球形，增殖受到抑制。而各对照组细胞生长、贴壁良好，形态正常。
3.讨论
本研究以Wnt-1特异性siRNA转染人肺腺癌细胞株A2，24h后RT-PCR检测，实验组（Wnt-1）对应靶基因表达受到抑制，条带明显减弱。各组内对照β-actin条带一致，说明Wnt-1和nm23-H1 siRNA转染后均能有效抑制细胞相应靶基因的表达。Western Blotting检测各组靶基因蛋白表达的变化，发现与其靶相应基因mRNA表达的变化一致。
转染后48小时后， Wnt-1组细胞形态出现明显变化，体积大小和形态不一，一部分胞体呈球形，细胞增殖亦受到显著抑制。结果表明，在人肺腺癌细胞株A2中Wnt-1基因表达可以促进肿瘤细胞增殖。实验结果与Iwao等人通过Wnt-1单克隆抗体和Wnt-1 siRNA阻断平滑肌瘤细胞Wnt-1基因表达的研究结果一致[1～3]。
参考文献
[1]Iwao Mikami，Liang You，Bia He，et al.Efficacy of Wnt-1 monoclonal antibody in sarcoma cells.Cancer，2005，5（53）：1012-1017.
[2]Xie FY，Woodle MC，Lu PY.Harnessing in vivo siRNA delivery for drug discovery and therapeutic development.Drug Discov Tody，2006，11：67-73.
[3]Cipollin G，Berti A，Fiore L，et al.Down-regulation of nm23-H1 gene inhibits proliferation.Int Cancer，1997，73（2）：297-302.endprint
