谢贤和 郑伟丽 林万尊 陈婷
[摘要] 意图 评论X线修正穿插互补基因1（XRCC1）Arg399Gln多态性对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者对铂类药物化疗敏理性的影响。 办法 选取23例初治的NSCLC患者，选用铂类为主的化疗计划。在化疗前，用聚合酶链反响-限制性片段长度多态性剖析（PCR-RFLP）检测外周血XRCC1 Arg399Gln基因型多态性，比较其不同基因型对化疗敏理性的影响。 成果 XRCC1 Arg399Gln 存在3个基因型，即Arg/Arg、Arg/Gln、Gln/Gln，其基因散布频率分别为43.5%（10/23）、39.1%（9/23）、17.4%（4/23）；3种基因型的化疗有用率分别为60.0%（6/10）、44.4%（4/9）、25.0%（1/4），其有用率差异无计算学含义（χ2=1.445，P=0.648>0.05）。 定论 XRCC1 Arg399Gln 位点基因多态性与NSCLC对铂类药物的化疗敏理性无显着影响。
[关键词] 非小细胞肺癌；XRCC1；基因多态性；化学医治
[中图分类号] R734.2；R730.53 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）06-0001-03
[Abstract] Objective To investigate the influence of XRCC1 Arg399Gln polymorphism genotype on platinum-based chemotherapy sensitivity in non-small cell lung cancer. Methods A total of 23 NSCLC patients were recruited， and were treated with platinum-based chemotherapy. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism（PCR-RFLP） analysis was performed to detect XRCC1 Arg399Gln polymorphism genotype from peripheral-blood， and the impact of XRCC1 Arg399Gln polymorphism on platinum-based chemotherapy sensitivity were compared. Results XRCC1 Arg399Gln contained three genotypes，Arg/Arg， Arg/Gln， Gln/Gln， and frequency distribution was 43.5%（10/23）， 39.1%（9/23）， 17.4%（4/23）； the response rates of chemotherapy were 60.0%（6/10）， 44.4%（4/9）， 25.0%（1/4）. There was no significant difference in response rates of chemotherapy among these three genotypes（χ2=1.445， P=0.648>0.05）. Conclusion Polymorphism in the XRCC1 Arg399Gln appears no significant impact on the response of NSCLC to platinum-based chemotherapy sensitivity.
[Key world] Non-small cell lung cancer； XRCC1； Genetic polymorphism； Chemotherapy
原发性肺癌（以下简称“肺癌”）坐落全国恶性肿瘤发病率及逝世率的首位[1]，80%～90%的肺癌病理类型为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）[2]，前期肺癌常无临床症状或症状不典型，简单导致漏诊或误诊[3]，57%的初诊患者现已发作远处搬运，不适合手术医治，因而化疗是晚期NSCLC首要的医治手法[4]。在我国，联合铂类的两药化疗计划是晚期NSCLC最常见的医治计划[5]。但不同的个别对铂类药物敏理性不同，导致效果和耐受性方面有较大的个别差异。研讨标明，铂类药物经过DNA损害诱导肿瘤细胞逝世，然后发挥抗肿瘤效果[6]。
X线修正穿插互补基因1（X-ray repair cross complementing gene 1，XRCC1）是DNA碱基切除修正（单链修正）体系（single-strand break，SSB）中的重要成分[7]，参加铂类药物引起的DNA损害修正进程，与NSCLC患者铂类药物敏理性和效果相关，因而研讨XRCC1基因对猜测NSCLC患者对铂类药物的敏理性可能具有较高的临床价值[8]。
1 材料与办法
1.1 一般材料
选取福建医科大学隶属榜首医院2016年8月～2017年11月初治的NSCLC患者23例，均无手术医治时机。ⅢA期4例，ⅢB期3例，Ⅳ期16例。其间男18例，女5例；年纪39～77岁，中位年纪53岁；均为汉族人。参阅UICC 世界 TNM 分期规范：其间腺癌16例，鳞癌6例，腺鳞癌1例。当选规范：病例的一般資料及化疗计划见表 1。一切病例均经病理查看证明为NSCLC；CT证明有可测量肿瘤病灶；化疗前患者血常规、肝肾功用均正常，心电图无显着反常；功用状 态Karnofsky评分均>60分。
1.2 样本收集
一切病例均在化疗前抽取2 mL外周血，置乙二胺四乙酸钠抗凝管。患者取外周血标本前均签署知情同意书，本研讨计划取得福建医科大学隶属榜首医院医学道德委员会同意。
1.3试验办法
运用EasyPure Blood Genomic DNA（北京全式金）试剂盒提取外周血DNA，DNA 置于-20℃低温冰箱保存备用。以聚合酶链反响-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）办法进行XRCC1基因Arg399Gln多态位点剖析[9]。引物为F：5-TGTCTCCCCTGTCTCGT-TCC—3；R：5-ACTTGTTCTCCCACCCCTGA-3，PCR反响总体积50 μL，其间含有0.1～0.2 μg模板 DNA、0.2 μmol/L各引物、0.2 mmol/L dNTP、1.25～1.50 UTaq聚合酶（北京全式金）、5 μL 10×反應缓冲液，用ddH2O2补至50 μL。PCR条件为：95℃预变性5 min，95℃ 30 s、56℃ 30 s、72℃ 30 s进行35个循环，72℃延伸10 min。扩增完毕后PCR产品用MspI内切酶（Biolabs）37℃消化30 min，2%琼脂糖凝胶（Biowest）电泳，核酸染料（上海生工生物工程有限公司）染色断定XRCC1基因Arg399Gln多态性。随机抽取30%样本，双盲法重复检测加以验证，成果彻底共同。
1.4 医治计划
一切患者均承受铂类药物为根底的联合计划化疗。其间卡铂（CBP）医治者5例，顺铂（DDP）医治者10例，奈达铂（NDP）医治者8例。化疗计划包含铂类药物加多西他赛或紫杉类（PTX）药物。[附注：卡铂注射液，百时美施贵宝（我国）投资有限公司，进口药品注册号：H20160423，规范：150 mg/15 mL/支；注射用奈达铂，南京先声东元制药有限公司，国药准字：H2003 0884，规范：10 mg；顺铂注射液，江苏豪森药业集团有限公司，国药准字：H20040813，规范：6 mL：30 mg；多西他赛，上海创诺制药有限公司，国药准字：H20113165，规范：0.5 mL：20 mg]。
1.5 效果鉴定规范
参照WHO实体瘤近期客观效果鉴定规范分为彻底缓解（CR）、部分缓解（PR）、安稳（SD）和发展（PD）。彻底缓解（CR）：悉数可测量病灶彻底消失继续4 周；部分缓解（PR）：病灶的最大直径与最大笔直横径乘积总和削减>50%，继续至少4 周；安稳（SD）：病灶最大直径与最大笔直横径乘积总和削减<50%或增大<25%，继续至少 4 周且无新病灶呈现；发展（PD）：病灶的最大直径与最大笔直横径乘积总和增大>25%，或呈现新的病灶。以 CR+PR为有用。
1.6 计算学办法
使用SPSS24.0计算学软件对数据进行计算处理。计数材料比较选用χ2查验或Fisher切当概率法查验，P<0.05为差异有计算学含义。
2 成果
2.1 基因型散布
XRCC1基因Arg399Gln扩增后呈现巨细为463 bp产品片段，经MspⅠ限制性内切酶酶切后见463 bp、277 bp和186 bp三种长度片段，其间野生纯合型（Arg/Arg）可见 277 bp和186 bp两条带，骤变纯合型（Gln/Gln）可见463 bp一条带，杂合型（Arg/Gln）可见463 bp、277 bp、和186 bp三条带，见图1。
2.2基因型散布及化疗有用率的联系
23例NSCLC患者XRCC1 Arg399Gln基因散布频率分别为Arg/Arg：43.5%（10/23）、Arg/Gln：39.1%（9/23）、Gln/Gln：17.4%（4/23）。带着XRCC1基因Arg399Gln Arg/Arg、Arg/Gln、Gln/Gln基因型的患者，客观有用（CR+PR）率分别为60.0%（6/10）、44.4%（4/9）、25.0%（1/4）。XRCC1基因Arg399Gln Arg/Arg、Arg/Gln、Gln/Gln三种基因型铂类化疗有用率差异无显著性（χ2=1.445，P=0.648>0.05），见表2。
3 评论
人体内的 DNA修正体系首要包含碱基切除修正（BER）、核苷酸切除修正（NER）和错配修正（MMR）[10，11]，XRCC1是重要的DNA修正基因，经过与多聚ADP核糖聚合酶、DNA连接酶 Ⅲ及DNA聚合酶β等效果，来修正各种DNA损害[12，13]。基因的多态性可能会影响XRCC1正常功用，下降 DNA修正才能[14]。
铂类药物是临床医治NSCLC最常用的化疗药物之一。铂类药物进入肿瘤细胞后，与其DNA双链结合构成加合物，导致肿瘤细胞DNA发作链间或许链内的交联，引起DNA仿制妨碍，然后导致肿瘤细胞凋亡[15]。当DNA结合物构成时，部分的加合物会敏捷被DNA修正体系所辨认和铲除。如果在肿瘤细胞凋亡前铲除加合物，则肿瘤细胞就会存活。此为肿瘤细胞对铂类药物的耐药机制。因而检测XRCC1基因型多态性对猜测化疗敏理性具有必定的辅导含义。
许崇安等[16]运用PCR-RFLP的办法对130例晚期非小细胞肺癌的患者进行了XRCC1与XRCC3多态性与铂类化疗联系的研讨，成果显现XRCC1基因Arg399位点Arg/Arg野生基因型患者的化疗有用率显着高于Arg/Gln、Gln/Gln两种基因型患者。XRCC1与XRCC3的多态联合可能与NSCLC铂类化疗敏理性有关。史美琪[17]也对112例晚期肺癌的患者进行XRCC1单核苷酸多态性与铂类化疗联系进行剖析，成果显现XRCC1基因Arg399位点Gln/Gln、Arg/Gln、Arg/Arg基因型带着者中，化疗有用率分别为36.4%、52.8%和43.1%，三者之间的差异无显著性。Liu等[18]也对199例晚期非小细胞肺癌进行XRCC1多态性与铂类化疗联系的研讨，但研讨成果显现XRCC1多态性与铂类化疗敏理性及患者生计时刻无显着的相关。别的，其他的研讨者也进行鼻咽癌[19]、卵巢癌[20]、结直肠癌[21]等多种肿瘤化疗敏理性与该基因多态性的相关性研讨，但成果不彻底共同。所以现在XRCC1基因多态性与化疗敏理性的联系仍需深化研讨。
本研讨发现XRCC1基因Arg399Gln基因表达中，带着Arg/Arg基因型患者化疗有用率为60.0%，高于带着Gln等位基因者：Arg/Gln基因型患者为44.4%，Gln/Gln基因型患者为25.0%。但Arg399Gln Arg/Arg、Arg/Gln、Gln/Gln三种基因型与铂类化疗有用率差异无显著性（χ2=1.445，P=0.648>0.05）。成果可能是因为肺癌的发作是多要素、多阶段和多基因的进程，本研讨仅对XRCC1基因Arg399位点进行研讨剖析具有必定的局限性。在往后的研讨中，需对其他基因进行更深化的独立与联合剖析。别的，本研讨样本量小，需求进一步扩展样本做深化研讨，为往后非小细胞肺癌铂类化疗供给依据，更好地辅导临床实践。
[参阅文献]
[1] 陈万青，郑荣寿，张思想，等. 2013年我国恶性肿瘤发病和逝世剖析[J].我国肿瘤，2017，26（1）：1-7.
[2] 王中华，徐兵河，梁刚，等.DNA修正基因XRCC1单核苷酸多态性与晚期非小细胞肺癌铂类药物化疗后生计期的联系[J].我国归纳临床，2006，（1）：1-3.
[3] 常志强. 12例肺癌误诊为肺脓肿临床剖析[J].空军医学杂志，2017，33（2）：139-140.
[4] 石遠凯，孙燕，于金明，等.我国晚期原发性肺癌诊治专家一致（2016年版）[J].我国肺癌杂志，2016，19（1）：1-15.
[5] Xue C，Hu Z，Jiang W，et al. National survey of the medical treatment status for non-small cell lung cancer（NSCLC）in China[J]. Lung Cancer，2012，77（2）：371-375.
[6] Kelland L.The resurgence of platinum-based cancer che-motherapy[J]. Nat Rev Cancer，2007，7（8）：573-584.
[7] Xu W，Chen Q，Wang Q et al.JWA reverses cisplatin resistance via the CK2-XRCC1 pathway in human gastric cancer cells[J].Cell Death Dis，2014，（5）：e1551.
[8] 刘东声.非小细胞肺癌NP计划化疗敏理性与DNA修正基因XRCC1多态性的联系研讨[J]. 今世医药论丛，2014，（15）：210-211.
[9] 王威，金如锋，吴芬，等.多重PCR-RFLP检测XRCC1基因两位点多态性[J].我国工业医学杂志，2008，21（1）：3-6.
[10] Schiller JH，Harrington D，Belani CP，et al.Comparison of four chemotherapy regimens for advanced non-small-cell lung cancer[J]. N Engl J Med，2002，346（2）：92-98.
[11] Xu W，Wang S，Chen Q，et al. TXNL1-XRCC1 pathway regulates cisplatin-induced cell death and contributes to resistance in human gastric cancer[J]. Cell Death Dis，2014， 5：e1055.
[12] 蒋祝昌. XRCC1与DNA修正[J].国外医学（生物医学工程分册），2003，26（5）： 234-237.
[13] 査燕燕，张军宁，南秀美，等. NP计划联合放疗医治Ⅲ期NSCLC的近期效果与XRCC1基因Codon399单核苷酸多态性的相关性[J].有用癌症杂志，2012，27（5）：472-474.
[14] 成莉，李琳，邢辉. XRCC1基因多态性与卵巢癌对铂类药物化疗敏理性的相关性研讨[J]. 临床肿瘤学杂志，2014，19（4）：312-317.
[15] Guminski AD，Harnett PR，deFazio A.Scientists and clinicians test their metal-back to the future with platinum compounds[J].Lancet Oncol，2002，3（5）：312-318.
[16] 许崇安，王小杰，张晔，等. XRCC1和XRCC3单核苷酸多态性与晚期非小细胞肺癌铂类药物化效果果的相关性[J]. 我国肺癌杂志，2011，14（12）：912-917.
[17] 史美祺.DNA修正酶XRCC1基因多态性与晚期肺癌化疗敏理性的联系研讨[J].临床肿瘤学杂志，2006，（8）：575-578.
[18] Liu L，Yuan P，Wu C，et al.Assessment of XPD Lys751Gln and XRCC1 T-77C polymorphisms in advanced non-small-cell lung cancer patients treated with platinum-based chemotherapy[J]. Lung Cancer，2011，73（1）：110-115.
[19] 刘龙静. XRCC1单核苷酸多态性与鼻咽癌铂类化疗敏理性的相关性研讨[D].广西：广西医科大学，2014.
[20] Michalska MM，Samulak D，Romanowicz H，et al.Single nucleotide polymorphisms （SNPs） of hOGG1 and XRCC1 DNA repair genes and the risk of ovarian cancer in Polish women[J]. Tumour Biol，2015，36（12）：9457-963.
[21] 曾福仁.XRCC1基因多态性与结直肠癌易理性及其化疗敏理性的联系[D].广州：南边医科大学，2014.
（收稿日期：2017-12-20）
