虞欢东++++++于海涛++++++夏建国++++++李军++++++丁鸿飞++++++周红建++++++裴静波
[摘要] 意图 调查顺铂（CDDP）联合吡柔比星（THP）对脑胶质瘤U87细胞株增殖的按捺效果。 办法 选用MTT法检测不同浓度CDDP、THP以及两者联合运用时对U87细胞增殖效果的影响。 成果 随药物浓度添加，CDDP组、THP组和联合组对U87细胞增殖按捺效果逐步增强（均P<0.01）。联合组对U87细胞增殖按捺率较同浓度CDDP组、THP组显着添加（P<0.05或P<0.01）。当CDDP和THP浓度为≤0.625μg/mL时，联合组Q值别离为1.72、1.31，两药联合运用具有协同效果，当CDDP和THP浓度≥1.25μg/mL时，联合组Q值别离为0.94、0.88、0.86、0.89，两药联合运用具有相加效果。 定论 CDDP联合THP较单纯的CDDP或THP按捺U87细胞增殖效果更强，具有浓度依赖性。在较低剂量下就能到达显着肿瘤按捺效应，对杀伤U87细胞具有切当协同效应。
[要害词] 脑胶质瘤；MTT；顺铂；吡柔比星；增殖
[中图分类号] R739.4[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701（2014）15-0001-03
Inhibition effect of cis-diaminedichloroplatinum(CDDP) combined with pirarubicin (THP) on cell proliferation of brain glioma U87
YU Huandong YU Haitao XIA Jianguo LI Jun DING Hongfei ZHOU Hongjian PEI Jingbo
Encephalopathy Center, Xiaoshan Traditional Chinese Medicine Hospital of Hangzhou, Hangzhou 311200, China
[Abstract] Objective To discuss inhibition effect of cis-Diaminedichloroplatinum (CDDP) combined with Pirarubicin (THP) on cell proliferation of brain glioma U87. Methods The MTT method was applied to detect the cell proliferation of brain glioma U87 in the influence by CDDP, THP and the combination of both under different concentration. ResultsAs the concentration of drugs rose, the influences on inhibition of cell proliferation of brain glioma U87 in CDDP group, THP group and combination group were enhanced gradually(P<0.01 on average). Compared with CDDP group and THP group under the same concentration, the inhibitory rate of cell proliferation obviously rose (P<0.05 or P<0.01). When the concentration in CDDP group and THP group was no more than 0.625μg/mL, the Q value in combination group were 1.72 and 1.31 respectively, which showed the coordination effect of combination of these two drugs. When the concentration in CDDP group and THP group was no less than 1.25μg/mL, the Q value in combination group were 0.94, 0.88, 0.86 and 0.89 respectively, which showed the additive effect of combination of these two drugs. ConclusionCompared with separate CDDP or THP, the combination of both CDDP and THP has more favorable inhibition of cell proliferation of brain glioma U87, with concentration dependent, which can achieve obviously tumor suppression effect under low dose, and has definitive coordination effect to kill and wound U87 cells.
[Key words] Brain glioma; MTT; Cis-Diaminedichloroplatinum(CDDP); Pirarubicins(THP); Proliferation脑胶质瘤是神经外科最常见的恶性疾病，约占颅内肿瘤的40％～50％[1]。脑胶质瘤的医治办法以手术切除为主，术后常予以辅佐性化疗，其间以顺铂为主的联合化疗是其现在常用的一线医治计划[2,3]。因为肿瘤对化疗药的灵敏性有很大差异，因而，脑胶质瘤的最佳化疗计划应是针对不同肿瘤特征为依据，挑选较灵敏化疗药进行个体化归纳医治。本研讨调查了顺铂（CDDP）联合吡柔比星（THP）对脑胶质瘤细胞株U87细胞的增殖按捺效果，评论两药在适宜浓度下的协同按捺效果。现报导如下。
1材料与办法
1.1材料
脑胶质瘤细胞株U87由华中科技大学同济医学院脑外科实验室供给。胎牛血清、RPMI1640购于美国Sigma公司。CDDP、THP别离购于齐鲁制药公司（国药准字H37021358）和深圳万乐药业公司（国药准字H10930105）。MTT细胞增殖剖析试剂为Promega公司产品，全波长酶标仪为Thermo公司产品。
1.2 办法
1.2.1 细胞培育及试剂装备脑胶质瘤细胞株U87细胞运用RPMI1640培育液（含10%胎牛血清），于37℃、5%CO2条件下培育箱中进行培育，定时替换培育液，待U87细胞增殖交融达80%左右进行消化传代。CDDP用PBS液配制成1mg/mL的贮存液，THP用PBS液配制成1mg/mL贮存液，贮存于-70℃冰箱保存待用。
1.2.2 MTT法检测细胞增殖按捺率[2] 取对数成长期的U87细胞，将U87细胞的浓度调至1.5×104/mL，每孔100μL接种于96孔板中，CDDP组、THP组、联合组别离参加不同浓度（10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125）μg/mL的药物（每个浓度各设3个复孔），其间联合组依据两药同浓度进行彼此组合。别的设置细胞空白对照组、药物单用组和联合药物组，各药物组设6个浓度水平，选用惯例MTT法测定U87细胞的增殖按捺率。
1.2.3 协同效果Q值的测定[4,5]依据金正均的概率和法核算其Q值，Q=E（A+B）/[EA + （1-EA）×EB]，其间E（A+B）、EA和EB别离为两药联合效果时和两药独自效果时的U87细胞增殖按捺率。当核算的Q值为0.85～1.15时，标明两药联合具有相加效果；当核算的Q值>1.15时，两药联合具有协同效果；当核算的Q值<0.85时，表明两药联合具有拮抗效果。
1.3 统计学办法
运用SPSS18.0 for windows软件进行统计学剖析，计量材料以均数±标准差（x±s）表明，组内和组间差异比较均选用方差剖析，P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 MTT检测三组药物培育48h时对U87细胞的增殖按捺率
培育48h时，跟着药物浓度的添加，CDDP组、THP组和联合组对U87细胞的增殖按捺效果逐步增强， 差异有统计学含义（均P<0.01）。联合组对U87细胞增殖按捺率较同浓度CDDP组、THP组显着添加， 差异有统计学含义（P<0.05或P<0.01）。见表1。
2.2 CDDP和THP联合用药的协同效果成果剖析
当CDDP和THP浓度为0.3125μg/mL、0.625μg/mL时，联合组的Q值别离为1.72、1.31，表明两药联合运用具有协同效果（Q>1.15）；当CDDP和THP浓度1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL时，联合组的Q值别离为0.94、0.88、0.86、0.89，表明两药联合运用具有相加效果（Q值为0.85～1.15）。
3 评论
神经胶质瘤是脑外科较常见的原发性的脑部肿瘤，具有高发病率、高复发率和低治愈率的特色，预后相对较差，逝世率较高[6,7]。神经胶质瘤首要来源于神经间质细胞，包含星形细胞瘤（Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ 级）、少突神经胶质细胞瘤和混合型神经胶质瘤[8,9]。神经胶质瘤的医治办法以手术切除医治为主，但因神经胶质瘤其分解差、增殖快，常呈浸润性成长，与正常的脑安排间鸿沟不是很清楚，大都不限于一个脑叶，向脑安排外呈指状深化损坏脑安排,往往难以作到悉数手术切除，一般均建议归纳医治[10-12]。现在临床上一般建议进行手术切除、术后放疗和化疗等归纳医治，特别术后辅佐化疗是防备其复发的要害，以推迟其复发和延伸患者的生计时刻，而联合用药能够增强肿瘤细胞对化疗药物的灵敏性[13-15]。
CDDP是常用神经肿瘤化疗药物之一，具有较强的抗癌活性，其机制首要是CDDP作为铂的金属络合物，进入癌细胞后逐步水化成反式并水解，首要效果于DNA的链间和链内的交链结构，搅扰癌细胞DNA的仿制，导致肿瘤细胞逝世[16,17]。THP为细胞周期非特异性药物，其机制首要是THP分子很快进入核内，按捺DNA聚合酶，阻挠核酸组成；药物嵌入DNA双螺旋链，使肿瘤细胞中止于G2期，导致细胞逝世。在单用CDDP或THP进行神经胶质瘤术后辅佐化疗时，临床效果不甚满足，这可能与肿瘤细胞的耐药性有关。肿瘤耐药机制与NF-κB的一些方针基因包含炎性因子基因、抗凋亡基因和多药耐药基因等很多影响细胞成长与凋亡的基因激活有关[18,19]。孙淑清等[20]证明脑胶质瘤中P170、MGMT、TOPII等蛋白表达与化疗药物灵敏性密切相关，可辅导临床挑选合理化疗药物。本研讨成果发现，随药物浓度添加，CDDP组、THP组和联合组对U87细胞增殖按捺效果逐步增强，且联合组对U87细胞增殖按捺率较同浓度CDDP组、THP组显着添加，提示CDDP联合THP较单纯的CDDP或THP按捺U87细胞的增殖效果更强，具有浓度依赖性。一起研讨发现当CDDP和THP浓度为≤0.625μg/mL时，Q>1.15，提示CDDP联合THP两药联合具有协同效果；当CDDP和THP浓度≥1.25μg/mL时，Q值为0.85～1.15，提示CDDP联合THP具有相加效果。
总归，CDDP联合THP较单纯的CDDP或THP按捺U87细胞的增殖效果更强，具有浓度依赖性。在较低剂量下就能到达显着肿瘤按捺效应，对杀伤U87细胞具有切当协同效应。
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（收稿日期：2013-12-17）
