IL10及TGFβ1在百草枯中毒大鼠中的表达及临床意义.pdf
胡沥+郭令丽
【摘要】目的：初步探索IL-10及TGF-β1在急性百草枯致肺损伤的作用。方法：将SD大鼠40只随机分为模型组及对照组，各20只，给予管喂百草枯制备中毒模型，并检测模型组血清中IL-10及TGF-β1的动态变化，分析其在百草枯中毒发病的关系。 结果：模型组大鼠血清中的IL-10及TGF-β1水平较同时段对照组水平高，差异有统计学意义（P<0.01）。结论：IL-10及TGF-β1与急性百草枯中毒的发病有密切关系，但其具体机制有待进一步研究。
【关键词】百草枯 白细胞介素-10 转化生长因子-β1 肺损伤
【Abstract】Objective： To analyze the possible pulmonary damages mechanism induced by paraquat ，and evaluate the IL-10 and TGF-β1 roles in the specific process。 Methods：we observe that the dynamic changes in serum IL-10 and TGF-β1 in different groups（a normal control group included 20 rats and a model group included 20 rats）at different periods，then we will analyze the results between different groups by analysis of variance。Results： Compared the levels of Serum cytokines（IL-10 and TGF-β1） within between groups at the same time，we find that the results were statistically significant in each group（P <0.01）.Conclusion：The cytokine IL-10 and TGF-β1 may play an important roles in early stages of pulmonary damages induced by paraquat.
【Keywords】Paraquat IL-10 transforming growth factor-β1 lung injury
【中图分类号】R967【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2014）01-0010-01百草枯属联吡啶类除草剂，使用范围广，其致死剂量低，目前尚无特效解毒剂，死亡率极高，是当前严重影响人民健康的中毒性疾病。其发病机制尚未完全清楚，因此其发病机制成为人们关注的热点。本实验运用免疫组化探讨IL-10及TGF-β1在急性百草枯致肺损伤中的表达，分析其与急性百草枯中毒肺损伤的关系，旨在探讨在百草枯中毒发病中的作用。
材料与方法
一 材料：
1 药物 百草枯购于东方农药公司，生理盐水，甲醛，乙醚。
2 动物 40只清洁健康雄性SD大鼠，体重200-250g，购于泸州医学院动物中心。
3 试剂 大鼠IL-10和TGF-β1 ELISA试剂盒购自武汉博士德公司，均为冻干标品，均为10ng/管，样品稀释液为30ml。
4 器材 灌胃器、无菌注射器（1ml、5ml、10ml）、天枰、动物手术器械、恒温水浴箱、台式离心机、-70°C冰箱、酶标仪、荧光显微镜、石蜡包埋机、自动脱蜡机（XL）、自动染色机、捞片机 、烤片机 、组织切片机、自动封片机、微量振荡器、MA-240D电子天平恒温干燥箱、显微照相系统、光学显微镜等。
二 方法
1 分组 SD大鼠随机分为两组，对照组与模型组，各20只。
2 动物造模方法 SD大鼠适应性喂养一周，随后禁食12小时，一次性灌胃染毒。即给予PQ 100mg/Kg，并稀释至1ml灌胃[1]，正常对照组给予1ml的生理盐水灌胃。
3 取材方法 分别于实验第12、24、48、72小时，乙醚分别麻醉对照组和模型组SD大鼠各5只后剖腹，腹主动脉采血5ml，离心，取上清液于-70°C冰箱保存备检。
4 检测方法 采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中的IL-10和TGF-β1的浓度，具体步骤按说明书规程操作，并于450nm处得到其OD值。再根据样品OD值计算出标准曲线，并在该曲线上查出相应的IL-10和TGF-β1的蛋白量。
5 数据及统计分析 采用SPSS 17.0统计软件包对结果进行分析。所有实验结果以均数±标准差表示，组间及组内均采用方差分析和t检验。各项检验结果均以P<0.05为差异有统计学意义。
实验结果
二、动物细胞因子的变化 不同观察时间段对照组、模型组大鼠血清IL-10和TGF-β的表达：
讨 论
近年来，尽管对急性百草枯中毒做了大量研究，但其发病机制仍不完全清楚，提出了很多学说，其中炎症介质学说就是研究的热点之一 [2-3]。Chesnutt AN[4]等研究发现，急性肺损伤早期纤维增生过程就已经开始，构成炎症反应与修复过程同时存在的不均一特征。早期肺泡炎是急性肺损伤的中心环节，并可参与启动后期肺纤维化过程。TGF-β1是目前发现的最强的细胞外基质沉淀促进剂，在肺损伤的早期由巨噬细胞分泌，刺激成纤维细胞增殖和分化。组织损伤早期，TGF-β1作为炎症因子，诱导中性粒细胞等炎症细胞趋化，加重炎症反应，导致组织破坏；在组织修复期，TGF-β1作用转为抑制炎症反应和促进修复，但过度TGF-β1的表达能够导致肺纤维化。
IL-10被认为是体内强而有力的免疫、炎症抑制因子，对炎症发展过程的多个环节均有抑制作用，能抑制多种炎症细胞合成细胞因子，是维持细胞因子网络平衡的重要因子[5-6]。本实验发现，随着时间的延长，治疗组与模型组中的TGF-β1与IL-10水平均逐渐升高，且TGF-β1与IL-10之间存在一定线性趋势，呈同步化升高，即IL-10随 TGF-β1升高而升高，呈动态变化变化趋势，均于72小时达到高峰。以上结果，说明SD大鼠灌胃百草枯后产生大量的促炎介质（TGF-β1）及抗炎介质（IL-10），生理情况下促炎介质（TGF-β1）与抗炎介质（IL-10）处于动态平衡中，不会发生炎症反应对组织脏器无损害，而在病理因素百草枯的作用下，促炎介质（TGF-β1）和抑炎介质（IL-10）失衡，启动、维持、放大炎症反应，促使肺组织进一步受损。由此可知，百草枯中毒肺损伤阶段，百草枯可使TGF-β1与IL-10失控性及失衡性释放，由此可能进一步加重肺组织损伤。
总之，TGF-β1与IL-10与急性百草枯中毒有密切关系，但其作用机制有待于进一步研究。
参考文献
[1]高燕，雍政，黄英，等. 百草枯建立肺纤维化动物模型的实验研究[ J ]. 空军总医院学报， 2003， 19 （4） ： 201
[2]隋宏，营向东，楚中华，等.大鼠急性百草枯中毒血清中细胞因子的动态变化[J].毒理学杂志，2007，21（1）：27-29.
[3]Ortiz LA ， Lasky J ， Hamilton RF ，et al. Expression of TNF and the necessity of TNF recept-orrs in bleomycin2induced lung injury in mice. Exp Lung Res ，1998 ， 24 ：
[4]Chesnutt AN，Matthay MA，Tibayan FA，et a1.Early detection of type III procollagen peptide in acute lung injury.Pathogenetic and prognostic significan ce.Am JRespirCritCareMed，1997 .156：840-845.
[5]禚志红，王怀立等.大鼠脑组织水肿模型中脑组织巨噬细胞炎症蛋白-2、IL-10含量测定[J].郑州大学学报（医学版），2008，43（1），84-87
[6]吕欣，李泉等。IL-10与全身炎症反应综合症[J].《国外医学》麻醉学与复苏分册，2002，23（4）：224-227
IL-10被认为是体内强而有力的免疫、炎症抑制因子，对炎症发展过程的多个环节均有抑制作用，能抑制多种炎症细胞合成细胞因子，是维持细胞因子网络平衡的重要因子[5-6]。本实验发现，随着时间的延长，治疗组与模型组中的TGF-β1与IL-10水平均逐渐升高，且TGF-β1与IL-10之间存在一定线性趋势，呈同步化升高，即IL-10随 TGF-β1升高而升高，呈动态变化变化趋势，均于72小时达到高峰。以上结果，说明SD大鼠灌胃百草枯后产生大量的促炎介质（TGF-β1）及抗炎介质（IL-10），生理情况下促炎介质（TGF-β1）与抗炎介质（IL-10）处于动态平衡中，不会发生炎症反应对组织脏器无损害，而在病理因素百草枯的作用下，促炎介质（TGF-β1）和抑炎介质（IL-10）失衡，启动、维持、放大炎症反应，促使肺组织进一步受损。由此可知，百草枯中毒肺损伤阶段，百草枯可使TGF-β1与IL-10失控性及失衡性释放，由此可能进一步加重肺组织损伤。
总之，TGF-β1与IL-10与急性百草枯中毒有密切关系，但其作用机制有待于进一步研究。
参考文献
[1]高燕，雍政，黄英，等. 百草枯建立肺纤维化动物模型的实验研究[ J ]. 空军总医院学报， 2003， 19 （4） ： 201
[2]隋宏，营向东，楚中华，等.大鼠急性百草枯中毒血清中细胞因子的动态变化[J].毒理学杂志，2007，21（1）：27-29.
[3]Ortiz LA ， Lasky J ， Hamilton RF ，et al. Expression of TNF and the necessity of TNF recept-orrs in bleomycin2induced lung injury in mice. Exp Lung Res ，1998 ， 24 ：
[4]Chesnutt AN，Matthay MA，Tibayan FA，et a1.Early detection of type III procollagen peptide in acute lung injury.Pathogenetic and prognostic significan ce.Am JRespirCritCareMed，1997 .156：840-845.
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[6]吕欣，李泉等。IL-10与全身炎症反应综合症[J].《国外医学》麻醉学与复苏分册，2002，23（4）：224-227
IL-10被认为是体内强而有力的免疫、炎症抑制因子，对炎症发展过程的多个环节均有抑制作用，能抑制多种炎症细胞合成细胞因子，是维持细胞因子网络平衡的重要因子[5-6]。本实验发现，随着时间的延长，治疗组与模型组中的TGF-β1与IL-10水平均逐渐升高，且TGF-β1与IL-10之间存在一定线性趋势，呈同步化升高，即IL-10随 TGF-β1升高而升高，呈动态变化变化趋势，均于72小时达到高峰。以上结果，说明SD大鼠灌胃百草枯后产生大量的促炎介质（TGF-β1）及抗炎介质（IL-10），生理情况下促炎介质（TGF-β1）与抗炎介质（IL-10）处于动态平衡中，不会发生炎症反应对组织脏器无损害，而在病理因素百草枯的作用下，促炎介质（TGF-β1）和抑炎介质（IL-10）失衡，启动、维持、放大炎症反应，促使肺组织进一步受损。由此可知，百草枯中毒肺损伤阶段，百草枯可使TGF-β1与IL-10失控性及失衡性释放，由此可能进一步加重肺组织损伤。
总之，TGF-β1与IL-10与急性百草枯中毒有密切关系，但其作用机制有待于进一步研究。
参考文献
[1]高燕，雍政，黄英，等. 百草枯建立肺纤维化动物模型的实验研究[ J ]. 空军总医院学报， 2003， 19 （4） ： 201
[2]隋宏，营向东，楚中华，等.大鼠急性百草枯中毒血清中细胞因子的动态变化[J].毒理学杂志，2007，21（1）：27-29.
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[4]Chesnutt AN，Matthay MA，Tibayan FA，et a1.Early detection of type III procollagen peptide in acute lung injury.Pathogenetic and prognostic significan ce.Am JRespirCritCareMed，1997 .156：840-845.
[5]禚志红，王怀立等.大鼠脑组织水肿模型中脑组织巨噬细胞炎症蛋白-2、IL-10含量测定[J].郑州大学学报（医学版），2008，43（1），84-87
[6]吕欣，李泉等。IL-10与全身炎症反应综合症[J].《国外医学》麻醉学与复苏分册，2002，23（4）：224-227
