陈敬潮 周东铭 连斯敏 张苏伟
[摘要] 意图 评论血液细胞剖析仪无法分类的黄疸标本，经过生理盐水等量稀释后其白细胞分类成果精确性和牢靠性。 办法 将无白细胞分类计数成果的黄疸标本与生理盐水等倍稀释后在LH750仪上机进行检测，将稀释后的白细胞分类计数成果与原血液标本在XN-1000血细胞剖析仪的计数成果做比照，剖析稀释后的黄疸标本的白细胞分类成果与原血液标本白细胞分类是否有差异。 成果 生理盐水稀释的黄疸标本，WBC<2.0×109/L时，相对偏差最小为0%，最大为9.03%；WBC>2.0×109/L时，相对偏差最小为0.09%，最大为5.21%，均契合要求。 定论 生理盐水等量稀释法可用于开始处理黄疸标本白细胞无法分类计数的问题。
[关键词] LH750血细胞剖析仪；白细胞五分类；比对试验；高胆红素
[中图分类号] R446.111 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2018）13-0111-04
Preliminary discussion on using equal dilution to solve the problem that LH750 could not classify white blood cells caused by Jaundice specimen
CHEN Jingchao ZHOU Dongming LIAN Simin ZHANG Suwei
Department of Clinical Laboratory， Shantou Central Hospital in Guangdong Province， Shantou 515041， China
[Abstract] Objective To investigate the accuracy and reliability of white blood cell classifications in normal saline diluted jaundice specimen which could not be classified by blood cell analyzer. Methods Jaundice specimens which not be classified were equally diluted with normal saline and assessed in LH750. Differential count of white blood cells after dilution was compared with the result of original specimen using XN-1000 blood cell analyzer. The white blood cell classifications of diluted jaundice specimen and the original blood sample were analyzed. Results In jaundice specimens diluted by normal saline， when WBC<2.0×109/L， minimum relative deviation was 0% and the maximum was 9.03%. When WBC>2.0×109/L， minimum relative deviation was 0.09% and the maximum was 5.21%. All the results met the requirements. Conclusion Equal dilution of normal saline could preliminarily solve the problem that white blood cells could not be classified in jaundice specimen.
[Key words] LH750 blood cell analyzer； Five classifications of white blood cells； Comparison test； Hyperbilirubinemia
臨床查验中，除掉试验室仪器自身功能有必定的局限性，其他非仪器要素包含血液状况、药物浓度等亦会对查验进程构成搅扰，导致血液检测呈现反常成果。如黄疸标本有时也会搅扰血惯例中的白细胞分类成果，影响疾病的精确判别等。贝克曼库尔特LH750五分类血细胞剖析仪选用V（容量）、C（电导）、S（光散射）的原理[1]，临床查验中大大都的血液标本进行血惯例白细胞五分类计数均用此法，快速精确。关于查验进程中呈现的黄疸标本，常呈现白细胞分类不精确乃至无法分类的状况。呈现此反常可能是由于黄疸对光散射构成的搅扰，或是胆红素含量过高构成的其他影响。希森美康XN-1000仪选用半导体激光流式细胞技能结合核酸荧光染色技能进行白细胞计数和分类。半导体激光照射在经过鞘流技能处理的细胞上，可依据每个细胞所发生的三种信号来辨别细胞类别，更大程度上削减其他要素对血细胞分类构成的搅扰，包含上述说到的黄疸血液标本中的高胆红素搅扰，可精确地对黄疸标本进行白细胞分类计数。本试验拟将LH750仪白细胞无法分类的黄疸标本等量稀释后从头在LH750进行分类计数并点评其白细胞分类成果的牢靠性。本文现对2016年11～12月呈现的共28例黄疸标本，取500 μL黄疸标本与等量生理盐水混匀后于LH750进行白细胞分类计数，将其成果与原标本在XN-1000仪所得的分类成果进行比较剖析，现报导如下。
1 材料与办法
1.1 标本挑选
挑选2016年11～12月来自我院送检标本中LH750仪无法进行白细胞分类计数，经生化查看总胆红素浓度增高的标本（总胆红素>34.2 μmol/L）：共28例。一切标本均采血2 mL于EDTA-K2抗凝的真空采血管，于2 h内完结标本检测。
1.2 仪器和试剂
贝克曼库尔特LH750血细胞剖析仪，专用试剂LH稀释液，Coulter Clenz清洗液，Coulter血细胞剖析仪系列溶血剂，Coulter白细胞五分类试剂包（Beckman Coulter试验体系（姑苏）有限公司，我国）；希森美康XN-1000血细胞剖析仪，专用稀释液：浓缩稀释液DST，稀释液DCL，专用溶血剂与染色液：溶血剂WDF、溶血剂WDF（染色液）、溶血剂WNR、溶血剂WNR（染色液）、稀释液DFL、溶血剂RET（染色液）、溶血剂PLT（染色液）、溶血剂SLS、溶血剂WPC、溶血剂WPC（染色液）（希森美康医用电子（上海）有限公司，我国）；0.9%的生理盐水。
1.3办法
1.3.1 0.9%生理盐水装备 精确称取0.90 g的氯化钠粉末，溶解于少数蒸馏水中，持续稀释至100 mL，摇匀。
1.3.2 验证LH750仪与XN-1000检测成果之间的可比性 依据《WT/T406.-2012 临床血液学查验惯例项目剖析质量要求》[2]：运用20份临床EDTA-K2抗凝全血样本别离在LH750仪与XN-1000仪两台仪器上严厉依照规范操作程序进行双份测定，搜集白细胞总数，白细胞五分类百分比，2 h内完结查验。以XN-1000的测定成果为规范，核算相对偏差，其间比对样本的白细胞总数WBC<2.0×109/L，2.0～5.0×109/L，5.0～11.0×109/L，11.1～50.0×109/L，>50.1×109/L的样本数量所占份额应别离达10%、10%、45%、25%、10%。故挑选当天试验前2 h内涵LH750仪上测得的契合上述白细胞浓度检测要求的临检标本各2、2、9、5、2例，置于两仪器从头进行白细胞五分类计数。依据同试验室两仪器白细胞五分类成果进行比较，差异有无统计学含义（置信区间95%）来标明LH750仪与XN-1000在白细胞分类计数方面的相对偏差是否在临床可承受规模内。
1.3.3 血惯例检测 取LH750仪查验进程中呈现的白细胞无法分类的黄疸标本，记载总胆红素水平，汲取黄疸全血标本500 μL与等量生理盐水混合后，在LH750仪上从头计数，稀释后的样本不再呈现无法分类的状况，散点图反常也康复了正常图谱，并记载白细胞五分类份额成果。一起将原黄疸标本于希森美康XN-1000仪进行检测，记载白细胞五分类成果。比较两仪器所得五分类百分比的成果，剖析稀释后的白细胞分类成果与比对仪器的成果是否存在显着性差异。
1.4 统计学办法
将28例稀释后的标本用LH750仪检测得出白细胞五分类的百分比，与对应标本在XN-1000所检测的的数据进行比较剖析：选用SPSS 16.0统计学软件包进行数据处理，选用配对规划材料的Wilcoxon符号秩和查验，P<0.05为差异有统计学含义。将20例全血标本别离在两仪器上所测得的白细胞五分类进行比较，选用线性回归剖析两仪器间的可比性：以Sysmex XN-1000血细胞剖析仪测定成果为X值，Beckman LH750血细胞剖析仪测定成果为Y值，：核算相对偏差（%）标明，相关性用r2标明。相对偏差要求参照《WT/T406.-2012 临床血液学查验惯例项目剖析质量要求》，r2越挨近1，拟合度越高。
2 成果
2.1 LH750儀白细胞无法分类计数的黄疸标本
共28例，标本散布在消化内科、普外一科、普外二科、肾内科，均随同TBIL增高，其间TBIL<100 μmol/L、100～200 μmol/L、200～300 μmol/L、300 μmol/L以上别离有6、9、4、9例，28例黄疸标本在LH750仪数据成果如下：提示NRBC假性计数，白细胞无分类成果，白细胞总数与XN-1000仪上的成果比较呈现显着增高的趋势，白细胞直方图、散点图图画呈现反常。调查白细胞散图散布，左下方有数量不等的赤色搅扰散点，且跟着胆红素浓度增高，搅扰散点增多（封三图4～5）。
2.2 LH750仪与XN-1000的比对试验
试验室成果可比性以相对偏差为点评目标，表1成果契合《WT/T406-2012 临床血液学查验惯例项目剖析质量要求》要求：共对20例血液标本进行查验（表1），每份标本别离运用XN-1000与LH750仪进行查验计数白细胞总数。以XN-1000检测成果为规范，核算相对偏差（要求WBC<2.0时相对偏差小于10.0%，其他相对偏差<7.5%）。试验成果中20例标本核算所得的相对偏差中，WBC<2.0×109/L时，相对偏差最小为0%，最大为9.03%；WBC>2.0×109/L时，相对偏差最小为0.09%，最大为5.21%，均契合要求，标明LH750仪与XN-1000在WBC计数方面的相对偏差在临床可承受规模内，可用XN-1000仪来验证LH750仪的成果。表2是LH750仪所检测得的上述20例标本白细胞五分类成果与对照仪器XN-1000比较，中性粒细胞（Neut.）、淋巴细胞（Lym.）、单核细胞（Mon.）相关性较好，r2别离是0.970、0.969、0.903；嗜酸性粒细胞（Eos.）次之，r2=0.859，嗜碱性粒细胞（Baso.）的r2=0.586，相关性欠佳。故可在接下来用XN-1000仪测得的白细胞分类成果作为此黄疸标本白细胞分类百分比成果，替代无法对黄疸标本进行白细胞分类计数的LH750仪的检测计数，与用生理盐水稀释后的样本白细胞分类百分比成果做比较剖析。
2.3 LH750仪与XN-1000五分类成果的差异性验证
稀释后的黄疸标本在LH750仪的五分类成果与原黄疸标本在XN-1000仪检测成果进行比较：将LH750白细胞五分类成果与XN-1000白细胞五分类成果进行收拾，因五种白细胞数据均不契合正态散布，用Wilcoxon符号秩和查验，调查Z值（表3），可得Neut、Mon、Lym、EOS、Baso五种白细胞双侧查验P值别离为0.133、0.339、0.933、0.187、0.344，故P>0.05，不能够以为稀释后的五分类份额与实在值存在显着差异。
3评论
LH750仪使用VCS技能别离检测细胞体积、细胞巨细与内部结构和细胞内的颗粒性、核分叶性，其集三种物理学检测技能于一体，在细胞处于天然原始的状况下对其进行多参数剖析。LH750仪首先在标本中参加溶血剂直接决裂并溶解红细胞；紧接着参加白细胞稳定剂来中和后红细胞溶解剂的作用，使白细胞外表、胞浆及细胞体积坚持不变。然后使用鞘流技能将细胞推进到活动细胞计数池（Flowcell）中，承受仪器VCS三种技能的检测：V、C、S三种探针，在坐落流式通道的某一方位，对经过的单列白细胞进行逐一的、一起的、三重的检测，速度快、精密度高、稳定性好，能快速精确对临床上很多的血惯例标本进行检测。与手艺镜检法比较，黄疸、血脂等要素会直接搅扰LH750仪以VCS为原理的分类计数剖析，导致白细胞分类计数成果呈现反常[3-4]。
高胆红素标本可搅扰LH750仪的白细胞分类计数，有学者研讨标明，这是由于患者所服用药物或许因疾病所造成的的自身生理改变可能会使细胞外表所带电荷发生改变，影响了计数进程中白细胞稳定剂所起的作用，阻挠了白细胞从肿胀状况快速恢復到原正常形状，发生改变的细胞形状与体积导致仪器无法正确判别，表现为白细胞散布散点图反常，呈现Imm.NE1、Imm.NE2及NRBC等假阳性报警[5]。别的，LH750仪在细胞分类计数进程中，血浆成分中存在的高胆红素会对一部分的红细胞溶血剂进行吸收，导致剩下不足量的溶血剂无法将红细胞彻底溶解，红细胞或红细胞碎片存在残留[6]。原理上LH750仪是依据细胞巨细和细胞结构对细胞进行分类和计数，因而在测定中仪器会误将这些剩余红细胞或红细胞碎片划分为白细胞或其他反常细胞，导致成果反常，无法分类。这能够解说在试验进程中呈现的黄疸标本白细胞总数与XN-1000仪比较增高的状况。总胆红素显着上升的标本中，留心显着反常的白细胞散布散点图：当总胆红素>200 μmol/L时，在白细胞分类散点图左下方的赤色搅扰散点区域规模扩展，数量增多。在临床查验上关于黄疸标本无法计数的问题，有文献显现，一种办法是经过洗刷血细胞后从头进行检测的办法（样本经1 500 r/min离心 5 min，汲取上层血浆，并弥补同等量的生理盐水）[7]；第二种办法是将标本置于不同检测原理的血细胞剖析仪上检测，得出较牢靠成果。本试验在第二办法的前提下加以改进，以XN-1000仪成果为基准，标本经过生理盐水等量稀释后在LH750仪上检测，处理白细胞无法分类计数的问题。
本试验首要思路是用生理盐水按1∶1份额稀释高胆红素标本，来削减高胆红素对LH750仪进行白细胞分类计数的搅扰，开始评论等量稀释法能否处理黄疸标本引起的LH750仪白细胞无法分类的问题。本试验中对选取的28例高胆红素标本，别离将500 μL的血液直接与等量生理盐水混匀后于LH750仪检测，可发现与本来无法分类白细胞比较，LH750仪可直接分类计数稀释后的黄疸标本，得出白细胞五分类成果，白细胞直方图、散点图图画正常，白细胞散点图左下方搅扰散点显着削减，一起经过比较剖析得出此白细胞五分类百分比成果与原血液标本在XN-1000仪检测成果并无显着差异。本试验标明，高浓度的胆红素可对以VCS为原理的LH750血细胞剖析仪检测进程发生搅扰，影响血细胞剖析仪对各类血细胞的分类判别，导致分类成果反常，终究仪器提示白细胞无法分类，所以将高胆红素血液标本用生理盐水对倍稀释，下降高胆红素浓度对作用于血细胞的红细胞溶血剂和白细胞稳定剂的影响，一起还可削减必定浓度的胆红素发生的色彩搅扰，实为一种便利可行的消除影响的办法[8]。
在临床查验中也发现，关于生化成果TBIL>34.2 μmol/L的黄疸标本，LH750仪可对部分标本进行精确的白细胞分类，乃至一些标本TBIL>200 μmol/L，也可得到血惯例白细胞分类成果。猜想有可能黄疸仅仅其间一个非必须要素，首要要素可能是标本血浆内其他某个要素导致的或许归纳要素导致的成果，而等量稀释后能够下降这个影响。
将LH750仪所检测的上述20例标本白细胞五分类成果与对照仪器XN-1000比较（r2值），二者在Baso的分类成果相关性欠佳（r2<0.5）。呈现上述现象的首要原因可能与被测标本外周血中Baso数量少（正惯例模0～1%），且LH750仪成果有用数字为0.1，故而在成果的标明上及后续核算中存在较大概论的随机误差。一些研讨成果标明，选用相对偏差（%）或许相关系数（r），经过嗜碱性粒细胞的计数成果来比较剖析两仪器的分类状况可比性，呈现相对较大的相对偏差、较差的相关性[9-12]。故仅经过核算相对偏差、相关系数来进行点评不同仪器分类成果可比性也并不适宜[13]。
本试验数据少，标本只选取了两个月内契合要求的28例标本，此定论有待进一步扩展样本数据规模再进行更深化的评论。本试验将稀释后的标本在LH750仪测得的成果与原标本在XN-1000仪所测成果比较来判别稀释后的血惯例成果牢靠性，但更为牢靠的是履行金规范[14，15]：将白细胞不分类的高胆红素标本进行手艺镜检，严厉履行白细胞反常分类的复检规范所得的，进而判别盐水稀释的白细胞分类成果是否精确，有待进一步的试验研讨。
综上所述，LH750仪对非黄疸患者全血的白细胞分类成果精确，但当标本自身呈现黄疸时，用LH750仪所得成果有时会呈现无法分类的状况，因而，LH750仪白细胞分类也只能对大大都标本进行一个快速精确的血惯例查验，当呈现其他反常细胞，白细胞直方图、散点图反常，白细胞不分类的特别标本状况时，应进行手艺镜检，并结合临床确诊状况，避免漏诊、误诊。
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（收稿日期：2018-02-26）
