铁炜炜 葛芬芬
[摘要] 意图 探討宫颈癌及癌前病变患者高危型人乳头状瘤病毒16（HPV16）感染与人类白细胞抗原Ⅰ（HLA-Ⅰ）表达的联系。 办法 选取2014年4月～2016年4月我院行手术切除术或妇科查看的123例宫颈病变患者为研讨目标，使用聚合酶链式反应（PCR）检测患者HPV阳性检出率，选用免疫安排化学S-P办法检测安排中HLA-Ⅰ蛋白表达水平，剖析HLA-Ⅰ与宫颈癌及癌前病变患者高危型HPV16感染之间的联系。 成果 宫颈炎安排中HPV16阳性检出率为8.33%，显着低于宫颈内上皮瘤变（CIN）安排中HPV16阳性检出率（31.25%），差异有计算学含义（P<0.05），CIN安排中HPV16阳性检出率为31.25%，显着低于宫颈鳞癌（CSCC）安排中阳性检出率（79.10%）（P<0.05）；宫颈炎安排中HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率为95.83%，显着高于CIN安排阳性表达率（40.63%）（P<0.05），CIN安排中HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率为40.63%，显着高于CSCC安排中阳性表达率（19.40%）（P<0.05）；宫颈癌安排中HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率与宫颈癌安排分解、临床分期以及淋巴结搬运密切相关（P<0.05）；相关性剖析成果显现，HPV16感染与HLA-Ⅰ蛋白表达呈显着负相关（r=-0.748，P<0.05）。 定论 HLA-Ⅰ表达及高危型HPV16感染与宫颈病变开展为宫颈癌密切相关，且HLA-Ⅰ蛋白表达与HPV16感染呈显着负相关。
[关键词] 宫颈癌；癌前病变；人乳头状瘤病毒16；人类白细胞抗原Ⅰ
[中图分类号] R737.34 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2017）12-0066-04
[Abstract] Objective To investigate the relationship between high-risk human papillomavirus 16（HPV16） infection and human leukocyte antigen Ⅰ（HLA-Ⅰ） expression in patients with cervical cancer and precancerous lesions. Methods A total of 123 patients with cervical lesions who underwent surgical resection or gynecological examination in our hospital from April 2014 to April 2016 were selected. The positive detection rate of HPV in patients was detected by polymerase chain reaction（PCR）. Immunohistochemistry S-P method was used to detect the expression of HLA-Ⅰprotein in tissues. And the relationship between HLA-Ⅰand HPV16 infection in patients with cervical cancer and precancerous lesions was analyzed. Results The positive detection rate of HPV16 in cervicitis tissues was 8.33%， which was significantly lower than that in cervical intraepithelial neoplasia（31.25%）， and the difference was statistically significant（P<0.05）. The positive rate of HPV16 in CIN tissues（31.25%） was significantly lower than that in cervical squamous cell carcinoma（CSCC） tissues（79.10%） （P<0.05）. The positive expression rate of HLA-Ⅰprotein in cervicitis tissue was 95.83%， which was significantly higher than that in CIN tissue （40.63%）（P<0.05）. The positive expression rate of HLA-Ⅰprotein in CIN tissues （40.63%） was significantly higher than that in CSCC tissues（19.40%）（P<0.05）. The positive expression rate of HLA-Ⅰprotein in cervical cancer was closely related to the differentiation， clinical stage and lymph node metastasis of cervical cancer tissues（P<0.05）. Correlation analysis showed that HPV16 infection was significantly negatively correlated with HLA-Ⅰprotein expression（r=-0.748， P<0.05）. Conclusion HLA-Ⅰ expression and high-risk HPV16 infection are closely related to the progression of cervical lesions to cervical cancer， and HLA-Ⅰprotein expression is negatively correlated with HPV16 infection.
[Key words] Cervical cancer； Precancerous lesions； Human papillomavirus 16； Human leukocyte antigenⅠ
宫颈癌是临床上女人最为常见的恶性肿瘤之一[1]，是全球范围内仅次于乳腺癌的女人第二大恶性肿瘤[2]。近年来，我国女人宫颈癌发病率出现显着增加趋势，严峻威胁了我国女人的身体健康及生命安全[3]。前期确诊并及时采纳医治办法对临床医治宫颈癌具有重要含义，但现在因为宫颈癌发病机制没有彻底清楚，临床仍缺少特效性确诊及医治药物[4]。本研讨旨在评论宫颈癌及癌前病变患者高危型人乳头状瘤病毒16（human papillomavirus 16，HPV16）感染与人类白细胞抗原Ⅰ（human leukocyte antigen Ⅰ， HLA-Ⅰ）表达的联系，试图为宫颈癌前期确诊及说明宫颈癌发病机制供给必定理论根据。
1 材料与办法
1.1 臨床材料
选取2014年4月～2016年4月我院行手术切除术或妇科查看的123例宫颈病变患者为研讨目标，一切患者临床材料齐全，且术前均未承受任何放化疗及激素医治，未兼并其他恶性肿瘤性疾病，年纪30～64岁，均匀（41.57±5.32）岁，经病理学确诊，宫颈炎24例，宫颈内上皮瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）32例，宫颈鳞癌（cervical squamous cell carcinoma，CSCC）67例。本研讨经本院道德委员会同意进行，标本收集契合《世界医学协会赫尔辛基宣言》。
1.2首要试剂
氯仿、异丙醇、异戊醇、DNA纯化试剂盒、PCR试剂盒，均购于上海生工公司；S-P试剂盒、DAB显色试剂盒，均购于北京中杉金桥技能公司；鼠抗人HLA-Ⅰ单克隆抗体、广谱型二抗，购于美国Cruz公司。
1.3 办法
1.3.1 DNA提取及HPV16阳性扩增 选用酚/氯仿抽提法提取新鲜标本安排总DNA，使用DNA纯化试剂盒进行DNA纯化。选用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR），以β-actin扩增阳性的DNA为模板进行HPV16片段扩增，一切引物由上海生工组成。详细操作严厉依照PCR扩增试剂盒进行。选用琼脂糖凝胶电泳检测HPV16阳性情况，以452bp处出现扩增产品为HPV阳性，标明安排受HPV感染，若无则为阴性，标明无HPV感染。引物序列见表1。
1.3.2 免疫组化办法检测HLA-Ⅰ蛋白表达 所取标本经10%甲醛固定，白腊包埋，制造厚度为4 μm的白腊切片；选用免疫组化S-P（streptavidin-perosidase）办法，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，选用S-P试剂盒检测白腊切片中HLA-Ⅰ表达，用已知阳性切片作为阳性对照，PBS缓冲液替代一抗作为阴性对照，详细操作严厉依照试剂盒使用说明进行。
1.4 S-P成果断定
以胞膜/胞酱染色出现棕黄色颗粒为阳性表达。高倍镜下调查，以细胞染色强度与阳性细胞所占百分比评分乘积进行计算学剖析，评分标准见表2[5]。以0～2分为阴性，符号为（-）；≥3分为阳性，符号为（+）。
1.5 计算学剖析
选用计算学软件SPSS 19.0进行数据计算剖析，计数材料选用χ2查验，相关性剖析选用Spearman秩相关查验，查验水准α=0.05，以P<0.05为差异具有计算学含义。
2 成果
2.1 HPV16在不同宫颈病变安排中检出情况比较
宫颈炎安排中HPV16阳性检出率为8.33%，显着低于CIN安排中HPV阳性检出率（31.25%），差异有计算学含义（P<0.05），CIN安排中HPV阳性检出率为31.25%，显着低于CSCC安排中阳性检出率（79.10%）（P<0.05）。见表3。
2.2 HLA-Ⅰ蛋白在不同宫颈病变中的表达情况比较
宫颈炎安排中HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率为95.83%，显着高于CIN安排阳性表达率（40.63%）（P<0.05），CIN安排中HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率为40.63%，显着高于CSCC安排中阳性表达率（19.40%）（P<0.05）。见表4。
2.3 HLA-Ⅰ蛋白表达与宫颈癌临床病理特征之间的联系
宫颈癌安排中HLA-Ⅰ蛋白表达与患者年纪无相关性（P>0.05），宫颈癌低分解安排中HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率为27.91%，显着高于高分解安排阳性表达率（4.17%）（P<0.05）；宫颈癌临床分期Ⅰ期安排中HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率为40.00%，显着高于临床分期Ⅱ期、Ⅲ期阳性表达率（12.50%、6.67%）（P<0.05），临床分期Ⅱ期、Ⅲ期安排中HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率比较，差异无计算学含义（P>0.05）；宫颈癌无淋巴结搬运安排中HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率为23.53%，显着高于有淋巴结搬运安排阳性表达率（3.85%）（P<0.05）。见表5。
2.4 HPV16与HLA-Ⅰ的相关性
选用Spearman秩相关性剖析成果可见，HPV16感染与HLA-Ⅰ蛋白表达呈显着负相关（r=-0.748，P<0.05），随HPV感染率升高，HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率呈显着下降趋势（P<0.05）。见图1。
3 评论
宫颈癌在我国发病率位居女人生殖道恶性肿瘤之首。据世界卫生安排计算[6]，全球范围内，每年新增宫颈癌发病病例约50万例，而我国发病病例可达14万。我国宫颈癌发病年纪多见于35岁之后，以45～50岁为高发。临床研讨证明[7]，前期宫颈癌患者治愈率显着高于晚期者，但因为现有确诊技能首要依赖于宫颈癌显着症状，大部分患者特征性临床症状出现较晚，严峻影响了宫颈癌的前期预警及有用确诊，导致许多患者失掉医治最佳时机。现在，寻觅新式前期确诊肿瘤标志物是宫颈癌医治亟待解决的关键问题[8]。
现在，宫颈癌发病机制没有彻底清楚，普遍认为其发病取决于病毒、宿主以及环境协平等三方面要素，其间HPV持续性感染是宫颈癌发病最为重要的要素之一[9]。研讨标明[10]，HPV持续性感染与宫颈疾病恶化密切相关，是反映宫颈病变严峻程度的猜测目标之一。HPV16是高危型HPV，可影响宿主细胞内基因表达以及正常蛋白质功用，然后改动细胞凋亡、DNA损害修正以及抗原呈上等一系列重要机制，促进细胞增加繁衍，诱导细胞躲避免疫监视并诱发肿瘤[11]。很多研讨标明[12-13]，高危型HPV16感染与宫颈癌发作开展密切相关。HLA-Ⅰ是由β2-MG轻链与糖蛋白重链组成的抗原分子，首要功用是将内源性抗原肽呈上到细胞外表[14]。当机体蛋白酶复合物降解细胞内病毒或许反常蛋白而且发作内源性抗原肽后，HLA-Ⅰ能够在抗原呈上元件帮忙下完结抗原肽拼装负载以及提呈，完成CD8+CTL对病毒抗原或本身反常蛋白的辨认以及免疫监视，然后起到调理适应性以及天然免疫应对的效果。研讨标明[15]，HLA-Ⅰ类基因表达缺失与宫颈癌发病及开展密切相关，与宫颈癌患者生存率下降相同存在密切联系。因而，本研讨旨在评论宫颈癌及癌前病变患者高危型HPV16感染与HLA-Ⅰ表达的联系，为宫颈癌前期确诊及说明宫颈癌发病机制供给必定理论根据。
本研讨成果标明，宫颈炎安排中HPV16阳性检出率为8.33%，显着低于CIN安排中HPV16阳性检出率（31.25%），CIN安排中HPV16阳性检出率（31.25%）显着低于CSCC安排中阳性检出率（79.10%），说明随宫颈病变程度加深，HPV16感染率呈显着升高趋势，CSCC安排中感染率最高，HPV16感染是一个较长的进程，CIN开展成为CSCC期间，HPV16可帮忙肿瘤细胞影响机体基因表达，协助肿瘤细胞躲避机体免疫监视以及铲除，然后导致肿瘤分散终究致癌；宫颈炎安排中HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率为95.83%，显着高于CIN安排阳性表达率（40.63%），CIN安排中HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率（40.63%）显着高于CSCC安排中阳性表达率（19.40%），说明跟着宫颈疾病恶性程度加深，HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率逐步削减，严峻宫颈疾病中存在HLA-Ⅰ表达缺点，提示HLA-Ⅰ表达缺点与宫颈癌发作有关，可作为宫颈癌前病变开展成为宫颈癌的肿瘤符号物。宫颈癌安排中HLA-Ⅰ蛋白表达与患者年纪无相关性，但随宫颈癌安排分解、临床分期以及淋巴结搬运出现显着下降趋势，说明跟着宫颈癌病况加剧，HLA-Ⅰ表达缺点越为严峻，HLA-Ⅰ表达缺点导致肿瘤细胞更易于躲避免疫监视及铲除，然后导致疾病开展及搬运。相关性剖析成果可见，HPV16感染与HLA-Ⅰ蛋白表达呈显着负相关，随HPV16感染率升高，HLA-Ⅰ蛋白阳性表达率呈显着下降趋势，即HLA-Ⅰ表达缺点率显着升高，估测在宫颈疾病开展中，HPV16可整合到HLA-Ⅰ内，导致HLA-Ⅰ基因发作骤变、缺失，导致肿瘤免疫逃逸并终究致癌，其详细效果机制值得进一步深入研讨[16-20]，HLA-Ⅰ蛋白表达与宫颈癌临床病理特征联系方面，本研讨成果显现HLA-Ⅰ蛋白表达与安排分解、临床分期以及淋巴结搬运等要素存在显着相关性（P<0.05），这些要素是宫颈癌病变的高危要素，需求引起医务人员的高度重视。
本研讨成果标明，HLA-Ⅰ表达及高危型HPV感染与宫颈病变开展为宫颈癌密切相关，估测HLA-Ⅰ表达缺点可作为宫颈癌前病变开展为宫颈癌的重要预警标志，HLA-Ⅰ蛋白表达与HPV感染呈显着负相关，为说明宫颈癌发病机制供给了必定根据，其详细相互效果机制，有待于进一步深入研讨。
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（收稿日期：2017-02-15）
