黄慧+左婷
[摘要]意图 制备龙脷叶配方颗粒并测定其质量，为龙脷叶配方颗粒质量剖析供给根据。办法 用水煎煮办法提取生药制备龙脷叶配方颗粒；树立适宜的高效液相色谱办法，选用甲醇和0.4%磷酸溶液依照48∶52的份额等度洗脱测定龙脷叶配方颗粒中的山柰酚-3-O-龙胆二糖苷含量。成果 山柰酚-3-O-龙胆二糖苷的线性规模是0.1208～1.098 μg，r=1.002；相对规范偏差为1.03%。定论 本研讨所树立的龙脷叶配方颗粒的制备及质量剖析办法精确牢靠，能够为其进一步的剖析和研讨打下了根底。
[关键词]龙脷叶；配方颗粒；山柰酚-3-O-龙胆二糖苷；质量剖析
[中图分类号] R927.11 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）05（c）-0090-04
[Abstract]Objective To prepare the Sauropus spatulifolius Beille dispersing granules and determine its quality，to provide the basis for the quality analysis.Methods Sauropus spatulifolius Beille dispersing granules were prepared by boiling water extraction method of crude drug，and the suitable HPLC method was established.The content of kaempferol -3-O-gentiobioside of Sauropus spatulifolius Beille dispersing granules was determined by using methanol and 0.4% phosphoric acid solution in accordance with the proportion of 48∶52.Results The linear range of kaempferol -3-O-gentiobioside was 0.1208-1.098 μg，r=1.002.The relative standard deviation was 1.03%.Conclusion The preparation and quality analysis method of Sauropus spatulifolius Beille dispersing granules established in this study is accurate and reliable，it can lay a foundation for further analysis and research.
[Key words]Sauropus spatulifolius Beille；Dispersing granules；Kaempferol -3-O-gentiobioside；Quality analysis
龍脷叶初次记载于《岭南采药录》，具有清肺止咳、抗炎镇痛、通便的效果[1]。其首要成分包含正十八醇、β-谷甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇酸酸酯、cyclohomonervilol和山柰酚-3-O-龙胆二糖苷等[2]。20世纪70年代，龙脷叶便以“龙利叶”之名收载于《我国药典》；近些年，已呈现关于龙脷叶的首要化学成分[3]、薄层色谱判定、龙脷叶化学成分药效学[4]、龙脷叶挥发性成分GC-MS测定[5]以及龙脷叶的质量剖析[6]等方面内容的报导。《我国药典》2015年版第一部初次将龙脷叶的“含量判定”收载其间。但在国内仍未见到龙脷叶颗粒制备工艺、龙脷叶颗粒的判定以及其质量剖析目标等内容的报导。本文优化龙脷叶配方颗粒制备办法，从辨别、查看以及含量测定等方面对龙脷叶颗粒的质量进行剖析，为龙脷叶配方颗粒质量剖析供给根据。
1仪器与试药
1.1仪器
日本岛津1260色谱仪（LC-20A），十万分之一天平（AB135-S，购自瑞典Mettler Toledo公司），超声波清洗器（KQ5200B，上海科导超声仪器有限公司），高速离心机（TGL-16C，上海安亭科学仪器厂）。
1.2试药
龙脷叶药材购自北京同仁堂大药房，经专家判定为大戟科植物龙脷叶Sauropus rostratus的枯燥叶。山柰酚-3-O-龙胆二糖苷对照品（含量≥98.0%）购自sigma公司（批号：20130301）。甲醇等试剂均为剖析纯，试验用水为纯净水（购自娃哈哈集团有限公司）。
2办法与成果
2.1龙脷叶配方颗粒的制备
2.1.1龙脷叶提取物制备工艺的挑选
本试验选用三要素三水平正交试验规划办法，以龙脷叶提取物提取率为挑选中心产品制备工艺的鉴定规范，以参加溶剂倍数、煎煮时刻和煎煮次数为三个要素，其相应要素的三水平见表1。前期试验成果显现，Rc是影响龙脷叶提取物提取率的最首要要素；加13倍量水煎煮2次、每次1.5 h提取率最高，是龙脷叶提取物的最佳提取工艺。
2.1.2龙脷叶配方颗粒的制备
称取龙脷叶药材质料适量，经简略除杂后，参加13倍量蒸馏水，沸后继续煎煮1.5 h，共煎煮2次，滤过，兼并滤液。于50～80℃旋转蒸腾，得龙脷叶提取物；参加适量麦芽糊精，经喷雾枯燥后制粒。
2.2样品溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备
精细称定山柰酚-3-O-龙胆二糖苷对照品5.04 mg，置于100 ml容量瓶中，用50%甲醇溶解、定容，摇匀，制成0.0504 mg/ml的对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的制备
取1 g龙脷叶配方颗粒研细，精细称定分量。将所称样品置于25 ml锥形瓶内，精细量取50%的甲醇25 ml，密闭超声40 min，补足丢失溶剂，摇匀，滤过即得。
2.3色谱条件
色谱柱选用ODS-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。活动相为甲醇-0.4%磷酸溶液（48∶52）；试验过程中选用1.0 ml/min的流速，检测波长设定为349 nm。
2.4龙脷叶配方颗粒质量剖析
2.4.1辨别
取本品适量，研细；取样品0.50 g溶于20 ml无水乙醇中，超声30 min，滤过，滤液于水浴锅上蒸干；残渣加无水乙醇溶解定容至1 ml容量瓶，作为供试品溶液。另取龙脷叶对照药材1.01 g加60 ml蒸馏水，加热煮沸30 min，滤过，滤液于水浴锅上蒸干；残渣加无水乙醇溶解定容至20 ml容量瓶，作为对照药材溶液。将5 μl供试品溶液和15 μl对照药材溶液别离点在薄层硅胶板上，置于加有适量正己烷-乙酸乙酯（1∶4）展开剂的展开槽中，按规则过程操作。显色剂选用10%硫酸乙醇溶液。成果显现，龙脷叶配方颗粒供试品溶液和龙脷叶对照药材溶液在薄层板中色斑的方位、数量根本共同（图1）。
2.4.2查看
2.4.2.1粒度 参照《我国药典》2015年版四部公例0982粒度测定法的第二法双筛分法对本品粒度进行测定。称取10.00 g龙脷叶配方颗粒，将颗粒置于10目筛进行筛动，搜集不能经过的部分；将剩下的部分置于80目筛进行筛动，搜集经过的部分；将搜集的两部分合在一起精细称定分量为0.6 g，所占百分比为6%，不超越15%，契合规则。
2.4.2.2水分 参照《我国药典》2015年版四部公例0832水分测定法对本品中所含水分进行测定。称取龙脷叶配方颗粒适量，平行3份，以相同的厚度放于称量瓶的底部，于105℃下枯燥至恒重。成果显现，水别离离为6.2%、5.8%、5.7%，均<8.0%，契合规则。
2.4.2.3溶化性 参照《我国药典》2015年版四部公例0104项下有关规则查看。称定龙脷叶配方颗粒10 g溶于200 ml热水，继续拌和5 min，颗粒悉数溶解，契合规则。
2.5龙脷叶配方颗粒有用成分含量测定
2.5.1专特点调查
按“2.3”项下的色谱条件操作，山柰酚-3-O-龙胆二糖苷峰核算理论板数≥3000；山柰酚-3-O-龙胆二糖苷峰与其他成分峰到达基线别离（R>0.05）。
2.5.2线性关系调查
将山柰酚-3-O-龙胆二糖苷对照品溶液的进样体积顺次设定为2、5、10、15、20 μl，按“2.3”项下色谱条件操作，记载峰面积。纵坐标为峰面积，横坐标为进样量，得规范曲线方程方程：y=1.432×106x-3.148×104（r=1.002）。山柰酚-3-O-龙胆二糖苷的线性规模为0.1208～1.098 μg。
2.5.3精细度试验
精细汲取10 μl对照品溶液，于“2.3”項下色谱条件下接连进样6次。成果显现，峰面积的相对规范偏差（RSD）为0.12%，标明精细度高。
2.5.4安稳性试验
取配方颗粒（批号：6076532）1 g制成供试品溶液，将其于室温下放置，每隔2 h进样1次，共测定6次，记载每次测定的峰面积。成果显现，峰面积的RSD为0.48%，标明在室温条件下，山柰酚-3-O-龙胆二糖苷在12 h内有很好的安稳性。
2.5.5重复性试验
取配方颗粒（批号：6076532）1 g制成供试品溶液，平行6份，于“2.3”项下色谱条件下进样测定，得出山柰酚-3-O-龙胆二糖苷的峰面积。成果显现，该批次配方颗粒中有用成分的均匀含量为0.3762 mg/g，RSD为0.14%，标明该试验办法重复性杰出。
2.5.6加样收回试验
精细称定已知含量（0.3828 mg/g）的配方颗粒（批号：6076532）0.5 g，平行6份，按“2.2.2”进行操作，别离参加4 ml山柰酚-3-O-龙胆二糖苷对照品溶液，于“2.3”项下色谱条件下进样测定，核算收回率，成果见表2。
2.5.7样品含量测定
取3批龙脷叶配方颗粒（批号：T1608078、6076532、6095873），制备成供试品溶液，别离测定3次有用成分含量（均按枯燥品核算），核算均匀含量，成果见表3。
3评论
3.1制备工艺调查
在中药试验中，常考虑将水煎煮提取法作为中药提取办法，其适用规模较广泛，而且具有较高的提取收回率[7]；近期研讨发现乙醇回流提取的提取收回率也较高，在重要范畴也有着较为广泛的使用。现在关于龙脷叶有用成分的提取首要包含以上两种办法[8]。水煎煮提取法所用溶剂为水，愈加经济实惠，洁净环保；所用设备简略操作，安全性好，更合适使用于出产，因而本试验选用水煎煮来取得龙脷叶提取物。龙脷叶配方颗粒的制备工艺选用正交试验办法对其进行挑选，以龙脷叶提取物的提取率为目标，以参加溶剂倍数（11、13、15倍）、煎煮时刻（1.0、1.5、2.0 h）、煎煮次数（1、2、3次）为三要从来规划试验。成果显现，加13倍量水煎煮2次，每次1.5 h时提取率最高，优选为最佳提取工艺。本试验选用上述提取办法提取3批龙脷叶，核算得龙脷叶提取物的均匀提取率为47.0%。本试验使用了喷雾枯燥制粒的制备工艺，防止龙脷叶所含挥发性成分因加热枯燥而形成丢失。
3.2龙脷叶配方颗粒的定性辨别
薄层色谱辨别简直成为中药材和中成药首选的辨别办法[9]。《我国药典》2015年版对龙脷叶生药材的辨别项选用的就是薄层色谱剖析办法；一起丘琴等[10]选用薄层色谱办法对龙脷叶的氨基酸与皂苷等部分进行了定性辨别。本研讨选用薄层色谱辨别对龙脷叶配方颗粒进行定性辨别。龙脷叶配方颗粒制成的供试品溶液与龙脷叶对照药材薄层色谱图的相同方位有相同的斑驳，阐明两者首要成分相同。该办法操作简略，成果牢靠。一起，龙脷叶配方颗粒的各个检测项也均契合《我国药典》2015年版要求。
3.3龙脷叶配方颗粒的定量剖析
相关研讨显现，龙脷叶含有皂苷类、苷类、生物碱、香豆素等多种有用成分，其间山柰酚-3-O-龙胆二糖苷在各个批次中的含量较为安稳，专特点杰出[11]。一起药理学研讨显现，山柰酚-3-O-龙胆二糖苷首要的药理学效果是抗炎、止咳、解痉、抗溃疡等，与龙脷叶配方颗粒在临床上的首要效果根本共同[12-14]，具有很高程度的代表性，因而，本试验将山柰酚-3-O-龙胆二糖苷作为质量剖析调查的首要目标。《我国药典》2015年版初次将山柰酚-3-O-龙胆二糖苷作为龙脷叶生药材含量测定的目标，进一步佐证了其作为龙脷叶制备颗粒质量剖析目标的可行性[4]。本试验选用高效液相色谱法测定龙脷叶配方颗粒中的山柰酚-3-O-龙胆二糖苷，经过对色谱条件的调查验证，该办法专特点高，测定有用、成果牢靠。
综上所述，本研讨所优化的龙脷叶配方颗粒制备工艺出产效率高、操作简略、安全环保，所得产品契合药典要求，合适用于大出产过程中龙脷叶配方颗粒的制备。一起，本文所选用的薄层色谱定性辨别办法以及高效液相色谱的定量剖析办法精确牢靠，操作简略，适用于龙脷叶配方颗粒的质量剖析评价。
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（收稿日期：2017-03-28 本文修改：祁海文）
